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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 30kd&60kd的cut-off管过滤效果不佳，怎样改进？
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遥控器68

金虫 (小有名气)

[求助] 30kd&60kd的cut-off管过滤效果不佳，怎样改进？

样品是植物叶片细胞，用0.1%sds提取液，苯酚抽提乙酸铵甲醇沉淀蛋白。
大体过程是这样的：1.鲜叶液氮研磨丙酮冲洗干净后做成干粉；
                        2.用0.1%sds提取液研磨提取蛋白（提取液：干粉=4ml：0.03）后70     摄氏度加热10min；
                        3.得到的研磨液高速离心去杂质后加入cut-off管的内管中6000转离心，分别用外管内的滤出液（A）和内管里的残留液（B）进行苯酚抽提等步骤，最后跑胶。

问题：离心后，内管底部总有黄色物质，我觉得可能会堵住滤孔，但是结果可能证明滤膜破损，因为A和B无论在单向胶还是双向胶的比较中都没有什么差异。请问是不是我使用的方法有错误，怎样改进？
          在一文章里有说，将sds研磨后的蛋白1：50稀释，然后过滤。他的浓缩方法是用真空冷冻干燥机。是否是这个原因？稀释后怎样浓缩？没有冷冻干燥机……
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1楼 2013-06-19 15:44:54
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遥控器68

金虫 (小有名气)
还是没有人……唉
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2楼2013-06-20 15:50:07
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与 2013-06-22 06:25:46
遥控器68: 金币+2, ★有帮助 2013-06-24 17:22:43
我倒是有个建议，你可以在过cut-off管子之前，将液体用0.2um的滤膜先过滤一下，然后稍微稀释一下再过管子
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天道酬勤
3楼2013-06-22 03:26:40
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遥控器68

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wchuangqi at 2013-06-22 03:26:40
我倒是有个建议，你可以在过cut-off管子之前，将液体用0.2um的滤膜先过滤一下，然后稍微稀释一下再过管子

可以试试，但是样品中小分子量蛋白的量本就不多，稀释后恐怕不容易沉淀。不过还是很感谢！
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-24 17:24:29
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