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30kd&60kd的cut-off管过滤效果不佳，怎样改进？
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样品是植物叶片细胞，用0.1%sds提取液，苯酚抽提乙酸铵甲醇沉淀蛋白。 大体过程是这样的：1.鲜叶液氮研磨丙酮冲洗干净后做成干粉； 2.用0.1%sds提取液研磨提取蛋白（提取液：干粉=4ml：0.03）后70 摄氏度加热10min； 3.得到的研磨液高速离心去杂质后加入cut-off管的内管中6000转离心，分别用外管内的滤出液（A）和内管里的残留液（B）进行苯酚抽提等步骤，最后跑胶。 问题：离心后，内管底部总有黄色物质，我觉得可能会堵住滤孔，但是结果可能证明滤膜破损，因为A和B无论在单向胶还是双向胶的比较中都没有什么差异。请问是不是我使用的方法有错误，怎样改进？ 在一文章里有说，将sds研磨后的蛋白1：50稀释，然后过滤。他的浓缩方法是用真空冷冻干燥机。是否是这个原因？稀释后怎样浓缩？没有冷冻干燥机…… |
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