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cnb1987

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-08-05 16:43:07
连接到原核表达载体上是可以翻译出蛋白的,但如果读框错了,翻译出的蛋白就不是目的蛋白,就没什么意思了。你可以把目的片段贴出来看看。
这么久还没构建好...

这是其标准序列mRNA
CTGGCCGCCGGCCGTCATGGCGTCTCCGCTCCGATTGCGCTCCGCGCTGGCCCTGGTTACAGGTGCGGGCGGCGGCATTGGCCGCGCCATCAGCGTGCGCCTCGCCGCTGAGGGGGCCGCCGTAGCCGCTTGCGACCTGGACGGGGCAGCAGCACGGGAGACGGTGCAGCTGCTGGGAGGGCCGGGGACCGAGGAGGGGGCGCCCCGCGGAGCCCACGCCGCCTTCCAGGCTGATGTGTCTGAGGCAGGGGCCGCTAGGCGCCTGCTGGAGCAAGTGCAGGCCTGCTTTTCTCGCCCGCCGTCTGTCGTTGTGTCCTGTGCGGGCATCACCAGAGATGAATTTCTACTCCACATGTCTGAGGACAACTGGGACAAAGTCATAGCTGTCAACCTCAAGGGCATCTTTCTAGTCACTCAGGCTGCAGCCCAAGCCCTCGTGTCCAGCGGCTGTCCTGGCTCCATCATCAACATCAGTAGCATCATAGGCAAGGTGGGGAACATGGGACAGACAAACTATGCAGCATCCAAGGCTGGAGTGATTGGGCTGACCCAGTCTGCAGCCCGGGAACTTGGACGACACGGGATCCGCTGTAACAGTGTCCTCCCAGGATTCATTAGAACACCCATGACCCAGAAAGTGCCACAGAAAGTGCTGGACAAGGTTACTGGAATGATCCCAATGGCACATATGGGGAACCCTGAGGATGTGGCAGATGTCGTCGCATTCTTGGCATCTGAAGACAGTGGATACATCACAGGGGCATCAGTGGAAGTCACTGGAGGTCTTTTCATGTAACTGCCTCAAGGACCCTGGACTCTGCTCACCCCCCCCACTGCTCTGCTGGCCTCCTGCTGATGAGGACTCGGAGTTCCCAGGCTACAAAAGGGGTGGCTGTGTATGGCTCAGGAATGCTGAATATGGGAGGCAGGGGTGCTTGTGACCCTAATAAATTCCAAAACCTCTTCCCTGCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

这是其中一个转录本的序列,你能帮我分析下吗?
CGCCGGCCGTC
ATGGCGTCTCCGCTCCGATTGCGCTCCGCGCTGGCCCTGGTTACAGGCCTGCTTTTCTCGCCCGCCGTCTGTCGTTGTGTCCTGTGCGGGCATCACCAGAGATGAATTTCTACTCCACATGTCTGAGGACAACTGGGACAAAGTCATAGCTGTCAACCTCAAGGTGGTGGTGACCTCTGAACCGGTGACTTCTGGGTCCTCTAGCCTGGGGAAAGAGTTGGAGGACCGTCACCCCAACTGATCCTTCCTGCCTTGTGACTTTCCCTCTCCACCACCAGGGCATCTTTCTAGTCACTCAGGCTGCAGCCCAAGCCCTCGTGTCCAGCGGCTGTCCTGGCTCCATCATCAACATCAGTAGCATCATAGGCAAGGTGGGGAACATGGGACAGACAAACTATGCAGCATCCAAGGCTGGAGTGATTGGGCTGACCCAGTCTGCAGCCCGGGAACTTGGACGACACGGGATCCGCTGTAACAGTGTCCTCCCAGGATTCATTAGAACACCCATGACCCAGAAAGTGCCACAGAAAGTGCTGGACAAGGTTACTGGAATGATCCCAATGGCACATATGGGGAACCCTGAGGACGTGGCAGATGTCGTCGCATTCTTGGCATCTGAAGACAGTGGATACATCACAGGGGCATCAGTGGAAGTCACTGGAGGTCTTTTCATGTAA
CTGCCTCAAGGACCCTGGACTCTGCTCACCCCCCCCACTGCTCTGCTGGCCTCCTGCTGATGAGGACTCGGAGTTCCAGGCTACAAAAGGGGTGGCTGTGTATGGCTCAGGAATGCTGAATATGGGAGGCAGGGGTGCTTGTGACCCTAATAAATTCCAAAACCTCTTCCCTGCC
11楼2013-08-14 11:00:41
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lvye3707

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-18 16:15:42
首先你这种想法理论上是可行的,但有很大风险
1.你不能保证目的片段连接到T vector上的方向,如果是反向连接,这样就肯定表达不出目的蛋白;
2.你不能保证从T载体上切下来再和pET28a连接后,读框没变。如果读框变 ...

从T载体上切下来,再和pET28a连接,不是和读框没关系么,读框怎么会改变呢?
12楼2013-08-14 11:18:12
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