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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教一些原核表达的问题。
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cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-08-05 16:43:07
连接到原核表达载体上是可以翻译出蛋白的，但如果读框错了，翻译出的蛋白就不是目的蛋白，就没什么意思了。你可以把目的片段贴出来看看。
这么久还没构建好...

这是其标准序列mRNA
CTGGCCGCCGGCCGTCATGGCGTCTCCGCTCCGATTGCGCTCCGCGCTGGCCCTGGTTACAGGTGCGGGCGGCGGCATTGGCCGCGCCATCAGCGTGCGCCTCGCCGCTGAGGGGGCCGCCGTAGCCGCTTGCGACCTGGACGGGGCAGCAGCACGGGAGACGGTGCAGCTGCTGGGAGGGCCGGGGACCGAGGAGGGGGCGCCCCGCGGAGCCCACGCCGCCTTCCAGGCTGATGTGTCTGAGGCAGGGGCCGCTAGGCGCCTGCTGGAGCAAGTGCAGGCCTGCTTTTCTCGCCCGCCGTCTGTCGTTGTGTCCTGTGCGGGCATCACCAGAGATGAATTTCTACTCCACATGTCTGAGGACAACTGGGACAAAGTCATAGCTGTCAACCTCAAGGGCATCTTTCTAGTCACTCAGGCTGCAGCCCAAGCCCTCGTGTCCAGCGGCTGTCCTGGCTCCATCATCAACATCAGTAGCATCATAGGCAAGGTGGGGAACATGGGACAGACAAACTATGCAGCATCCAAGGCTGGAGTGATTGGGCTGACCCAGTCTGCAGCCCGGGAACTTGGACGACACGGGATCCGCTGTAACAGTGTCCTCCCAGGATTCATTAGAACACCCATGACCCAGAAAGTGCCACAGAAAGTGCTGGACAAGGTTACTGGAATGATCCCAATGGCACATATGGGGAACCCTGAGGATGTGGCAGATGTCGTCGCATTCTTGGCATCTGAAGACAGTGGATACATCACAGGGGCATCAGTGGAAGTCACTGGAGGTCTTTTCATGTAACTGCCTCAAGGACCCTGGACTCTGCTCACCCCCCCCACTGCTCTGCTGGCCTCCTGCTGATGAGGACTCGGAGTTCCCAGGCTACAAAAGGGGTGGCTGTGTATGGCTCAGGAATGCTGAATATGGGAGGCAGGGGTGCTTGTGACCCTAATAAATTCCAAAACCTCTTCCCTGCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

这是其中一个转录本的序列，你能帮我分析下吗？
CGCCGGCCGTC
ATGGCGTCTCCGCTCCGATTGCGCTCCGCGCTGGCCCTGGTTACAGGCCTGCTTTTCTCGCCCGCCGTCTGTCGTTGTGTCCTGTGCGGGCATCACCAGAGATGAATTTCTACTCCACATGTCTGAGGACAACTGGGACAAAGTCATAGCTGTCAACCTCAAGGTGGTGGTGACCTCTGAACCGGTGACTTCTGGGTCCTCTAGCCTGGGGAAAGAGTTGGAGGACCGTCACCCCAACTGATCCTTCCTGCCTTGTGACTTTCCCTCTCCACCACCAGGGCATCTTTCTAGTCACTCAGGCTGCAGCCCAAGCCCTCGTGTCCAGCGGCTGTCCTGGCTCCATCATCAACATCAGTAGCATCATAGGCAAGGTGGGGAACATGGGACAGACAAACTATGCAGCATCCAAGGCTGGAGTGATTGGGCTGACCCAGTCTGCAGCCCGGGAACTTGGACGACACGGGATCCGCTGTAACAGTGTCCTCCCAGGATTCATTAGAACACCCATGACCCAGAAAGTGCCACAGAAAGTGCTGGACAAGGTTACTGGAATGATCCCAATGGCACATATGGGGAACCCTGAGGACGTGGCAGATGTCGTCGCATTCTTGGCATCTGAAGACAGTGGATACATCACAGGGGCATCAGTGGAAGTCACTGGAGGTCTTTTCATGTAA
CTGCCTCAAGGACCCTGGACTCTGCTCACCCCCCCCACTGCTCTGCTGGCCTCCTGCTGATGAGGACTCGGAGTTCCAGGCTACAAAAGGGGTGGCTGTGTATGGCTCAGGAATGCTGAATATGGGAGGCAGGGGTGCTTGTGACCCTAATAAATTCCAAAACCTCTTCCCTGCC
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11楼2013-08-14 11:00:41
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lvye3707

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-18 16:15:42
首先你这种想法理论上是可行的，但有很大风险
1.你不能保证目的片段连接到T vector上的方向，如果是反向连接，这样就肯定表达不出目的蛋白；
2.你不能保证从T载体上切下来再和pET28a连接后，读框没变。如果读框变 ...

从T载体上切下来，再和pET28a连接，不是和读框没关系么，读框怎么会改变呢？
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12楼2013-08-14 11:18:12
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