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spritesu主管区长
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[求助]
甲基化思路
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想请教各位做甲基化的大侠 大家做甲基化都是什么思路啊？ 我知道这问题有点大 但是偶想听听各种思路 基于高通量测序的甲基化是什么思路 分子实验的甲基化是什么思路     |
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 核酸生物学实验经验 |
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spritesu
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流，请问你是做表观遗传学的吗？ 2013-06-16 16:01:43
myprayer: 金币+2, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 08:16:20
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DNA甲基化的高通量测序的基本方法可以分为两大类： 1.非质谱方法：比如重亚硫酸盐测序方法检测DNAde甲基化；甲基化-敏感性单链构想分析；DNA的甲基化改变的变性梯度胶电泳；DNA的甲基化特异性寡核苷酸生物芯片分析，生物芯片分析也能够用于DNA测序等等。 2.质谱方法：测定DNA甲基化修饰之后的相对分子量变化，MS-MS既可以用测定多肽序列，也可以用于测定寡核苷酸序列，可以在测定甲基化特异性寡核苷酸序列前用限制性内切酶切开DNA，不含有修饰的DNA部分可直接用酶法和化学法测定，剩下的有修饰的部分DNA片段用MS-MS。 参考文献： 1.MMB 507-DNA methylation,which is one of Methods in Molecular Biology Series.http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6015850 2.John N. Abelson Melvin I. Simon ect .,Method in Enzymology Vol-402,Biological Mass Spectrometry,Elsevier Inc,2005. http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5795342 专门讲核酸的质谱实验的书现在不在我手里。抱歉！ |
3楼2013-06-16 14:28:21
spritesu
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【答案】应助回帖
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DNA甲基化的测序的研究是现在研究的热点表观遗传学研究中的DNA甲基化的结构和功能影响的第一步，或者说起点，没有这一步，DNA甲基化（本身就是生命科学的研究最前沿之一）的生物效应只是空中楼阁。DNA甲基化不被认为是DNA的碱基序列发生了改变，即遗传物质未变生物体的表达性状却改变了。 高通量DNA的甲基化测序研究本身也是高通量DNA测序的一个重大进展。DNA的核苷和碱基的修饰种类很多，这些修饰成分都不能用常规的酶法和化学法测定。 最好的高通量DNA的修饰成分的测序是质谱方法：测定DNA甲基化修饰之后的相对分子量变化，MS-MS既可以用测定多肽序列，也可以用于测定寡核苷酸序列，可以在测定甲基化特异性寡核苷酸序列前用限制性内切酶切开DNA，不含有修饰的DNA部分可直接用酶法和化学法测定，剩下的有修饰的部分DNA片段用MS-MS。目前是需要很大的发展。 |
6楼2013-06-17 11:28:27
spritesu
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9楼2013-06-17 15:48:16
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