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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收问题
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...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶回收问题

图片1是反向pcr结果，然后将红框和蓝框的带进行胶回收（胶回收试剂盒），回收的产物跑胶结果如图片2.请问为啥都在胶孔处，跑不动啊，我回收的是啥玩意啊？谢谢。
胶回收问题
图片1.png


胶回收问题-1
图片2.png
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1楼 2013-06-09 10:54:54
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
★ ★
1949stone: 金币+2, 清晰锐利 2013-06-09 14:17:21
你的PCR条带弥散，条带质量就不好。其次，看你第二张图，溴酚蓝都跑了这么远了，假如你回收到，肯定早出来了，这个说明你没回收到。
也不知你是怎么回收的，回收用了多少量？
建议你再优化下PCR体系，以条带清晰锐利为好。
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思路决定出路。。。
2楼2013-06-09 12:05:25
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-06-09 12:05:25
你的PCR条带弥散，条带质量就不好。其次，看你第二张图，溴酚蓝都跑了这么远了，假如你回收到，肯定早出来了，这个说明你没回收到。
也不知你是怎么回收的，回收用了多少量？
建议你再优化下PCR体系，以条带清晰锐 ...

谢谢
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3楼2013-06-09 14:55:17
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
...山雨: 金币+3, ★有帮助 2013-06-12 22:14:16
没有回收到东西 在孔里的不是目的条带 是杂质核酸 可能是电泳缓冲液不新鲜
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4楼2013-06-09 16:27:02
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-09 16:27:02
没有回收到东西 在孔里的不是目的条带 是杂质核酸 可能是电泳缓冲液不新鲜

哦是不怎么新鲜了，不过就算是杂质核酸，那原来回收的位置是5000多和3000多大小，那么为啥回收后就跑不动留在胶孔了呢？
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5楼2013-06-11 11:04:24
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ...山雨 at 2013-06-11 11:04:24
哦是不怎么新鲜了，不过就算是杂质核酸，那原来回收的位置是5000多和3000多大小，那么为啥回收后就跑不动留在胶孔了呢？...

我猜可能是你这个没有回收到东西 在孔里发亮的不知道是啥东西啊 我以前也碰到过这种情况
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6楼2013-06-11 12:03:12
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...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-11 12:03:12
我猜可能是你这个没有回收到东西 在孔里发亮的不知道是啥东西啊 我以前也碰到过这种情况...

嗯，再做吧。谢谢了
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7楼2013-06-12 22:13:09
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wangjiaxing1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也出现过这样的问题，反向PCR条带很清晰，胶回收后在跑电泳，什么都没有了
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8楼2013-09-12 09:37:53
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因为吃饭

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

胶孔处的肯定不是你的目的条带。
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辩证。
9楼2013-09-12 10:03:34
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
...山雨: 金币+7 2013-09-15 11:11:12
1.回收完的鉴定电泳一定要带marker，要养成无marker不跑电泳的习惯，我一般还习惯带上未回收的少量样品作对照。2.电泳孔里的亮的不一定是DNA，有时是电泳缓冲液在孔里形成的气泡折光，或胶孔附近的折射造成的。3.回收前的带太弥散了，根本无法判断是否为所要的带。4建议PCR鉴定，如果PCR成功就试试二次PCR。
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10楼2013-09-13 10:08:10
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