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crystalzl661

铁虫 (初入文坛)

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虫号: 1200584

[交流] 构建MDCK单层细胞膜完整性的评价方法

最近要用单层的MDCK细胞做转运实验，但是在查文献的时候发现一般要先验证单层膜完整性，或者说细胞融合情况。一般有三种方法：测定TEER、检测膜两侧的碱性磷酸酶ALP活性以及测细胞旁路转运效率（一般用荧光素钠等细胞旁路转运物质）。想求助各位大侠有谁做过相关实验，能提供一些经验的。
1、我最近测定的TEER值（20万/孔种12孔transwell板，长24h，TEER值为800Ω）似乎有些高，我不确定是不是操作的问题，不知道有没有大侠做过相关实验可以提供些依据？
2、用ALP试剂盒检测细胞极性，应该取培养基直接测定还是要将细胞裂解之后测细胞内部的碱性磷酸酶活性？
3、究竟这三种方法测定得到怎样的结果可以说明单层细胞膜完整，可以进行转运实验。
4、在transwell板上进行的转运实验一般是半小时取样，连续取样3个小时，比如每次取200μl样品进行测定（顶侧500μl，底测1500μl），请问结果应该如何计算，有没有公认的或者通用的公式。结果应该用折线图表示还是只要算出表观渗透系数Papp就可以了？
求有做过这部分实验的大侠帮助啊！！！万分感谢！！！

[ Last edited by crystalzl661 on 2013-6-5 at 13:19 ]

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