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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » AFLP试剂盒
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)

[求助] AFLP试剂盒

AFLP试剂盒买了半年多了，由于实验进程除了买的最初用过两次外，中间的半年多一直保存于-40度，请问这样试剂盒中的试剂还能正常使用吗？试剂盒很贵，如果试剂出现问题要怎么补救呢？
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1楼 2013-05-31 10:07:32
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shucanwei at 2013-06-06 00:36:43
感觉模板的量多了。
你可以用模板1（模板2都降解了，重新提取吧），再做一次酶切，体系如你的，用1ug的量就行，没切后的产物全部上样电泳，以同样模板量的不酶切的模板做为对照，一起电泳（即1ug的DNA稀释到25ul的 ...

好的，谢谢，接下来做双酶切我一定会注意的！那我先用模板1的酶切产物做接下来的连接、预扩和选扩，看看结果怎么样。
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7楼2013-06-06 08:51:45
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的，放心用吧，没问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
2楼2013-06-03 06:58:00
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shucanwei at 2013-06-03 06:58:00
可以的，放心用吧，没问题

哦。我现在在做双酶切，但是酶切产物跑电泳什么都没出来，接着做连接、预扩增和选扩增后能跑出引物二聚体，请问这是不是说明在双酶切这部酶出了问题而后边的引物并没有问题呢？我是不是只要重新买双酶切的试剂就可以？
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3楼2013-06-03 10:39:29
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不一定是酶的问题，没有那么容易坏的，把酶切体系发来看看。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
4楼2013-06-04 01:21:55
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shucanwei at 2013-06-04 01:21:55
不一定是酶的问题，没有那么容易坏的，把酶切体系发来看看。

我后来又做了一次，增加了模板的量，酶切的体系是5×reaction buffer  5μl，template DNA 18μl（浓度大约是100ng/μl），EcorI/MseI enzyme mix 2.0μl ，25μl。跑出来的结果如图，顺序一次是10000的marker，模板1，模板2，模板1双酶切产物，模板2双酶切产物。
AFLP试剂盒
20130605172800.jpg
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5楼2013-06-05 17:28:43
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lingling1988: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-06 08:49:24
感觉模板的量多了。
你可以用模板1（模板2都降解了，重新提取吧），再做一次酶切，体系如你的，用1ug的量就行，没切后的产物全部上样电泳，以同样模板量的不酶切的模板做为对照，一起电泳（即1ug的DNA稀释到25ul的体系），把电泳图再放上来看一下。
模板2不能用了。
其实你图中模板1的酶切结果是ok的。
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
6楼2013-06-06 00:36:43
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shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lingling1988 at 2013-06-06 08:51:45
好的，谢谢，接下来做双酶切我一定会注意的！那我先用模板1的酶切产物做接下来的连接、预扩和选扩，看看结果怎么样。...

好的，祝顺利！
电泳结果用2%的胶跑吧。
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
8楼2013-06-07 00:46:19
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by shucanwei at 2013-06-07 00:46:19
好的，祝顺利！
电泳结果用2%的胶跑吧。...

嗯，好的~
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9楼2013-06-07 09:50:06
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lingling1988

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by shucanwei at 2013-06-07 00:46:19
好的，祝顺利！
电泳结果用2%的胶跑吧。...

最近我用得到的双酶切产物做了连接、预扩和选扩，然后跑了一下变性胶，模板是相同的，第一个和最后一个都是MARKER（图中看到的两条带是50bp和100bp），中间是24对不同的引物组合跑出的条带。得到的结果如下图，麻烦帮忙指教一下这次AFLP存在什么问题，应该注意哪些问题。谢谢~
AFLP试剂盒-1
变性胶.jpg
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10楼2013-06-11 21:14:38
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