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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » lps刺激raw264.7细胞
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zhuhuatuo123

新虫 (初入文坛)
楼主后来找到原因了？做成功？我用LPS刺激RAW 24h并没有什么差异。现在很捉急。
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bebetterthenyesterday
11楼2013-11-20 16:05:37
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淼淼好孩子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhuhuatuo123 at 2013-11-20 16:05:37
楼主后来找到原因了？做成功？我用LPS刺激RAW 24h并没有什么差异。现在很捉急。

扩大细胞密度
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12楼2013-12-06 20:12:00
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li淡淡的记忆

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 杞人不忧天 at 2013-05-31 16:17:40
强烈关注！！！我也是做这个炎症模型，做了一个多月都没成功。做了LPS的梯度，做到50μg/ml都没有诱导出来。怀疑是细胞的问题

是的。这个细胞很容易变，变了的话就诱导不出来炎症模型
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13楼2014-01-06 12:11:50
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zhuhuatuo123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

24小时太长了，3-6h内较适宜
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bebetterthenyesterday
14楼2014-03-02 11:38:04
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阎魔瞳

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好，我也是用LPS刺激raw264.7，上学期做了一个学期，就是对LPS没反应，查了好多资料，换了LPS，血清，检测NO试剂盒,这学期用的是5%的血清养的细胞，实验前进行了饥饿处理，还是不行，打电话问细胞库的老师，老师说可能是细胞变异了，我去，细胞变异了，我还做个毛线，唉，惆怅中，可是我一个同学用的就是我的这个细胞做实验，各项因子检测结果都挺好，上学期也用LPS刺激过，没有效果，以为LPS有问题，还换了家试剂公司，看这情况，估计是细胞有问题了，3小时，6小时，24小时都测过了，6小时时稍微高一点点，还有一个现象就是，空白对照组，不加任何药物刺激，测出来的NO含量也高好多，4uM左右，以前师兄师姐做得空白组一般是2uM,LPS刺激组8UM左右，我现在做出来LPS和空白对照组的差不多，有时候甚至更低。
不知道你现在是如何解决的，可以交流交流嘛？
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15楼2014-03-18 15:23:53
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gavel

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个细胞很敏感又容易变异，如果拉丝长触足就是已经变异了，正常来说LPS刺激很低浓度反应就会很大的，所以在你的试剂没问题的情况下，细胞应该是最可能出现问题的，做浓度梯度和时间梯度看看是不是细胞什么反应都没有，还有这个细胞是用细胞刮刀刮下来传代的，血清也要好的，如果血清不是澳洲FBS的话，最好灭个活去掉些补体减少背景干扰
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16楼2014-03-19 00:52:10
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已支

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我现在也在做这个模型，LPS 100ng/ml 刺激 20小时能测到NO，但是做PCR时，模型组做的不是很好，药物浓度梯度效果也不是很明显，我觉得是不是该加大刺激浓度！
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17楼2014-03-29 17:21:59
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天使的指纹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 滴滴昭珏 at 2013-05-31 16:42:35
我之前做LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,检测NO的量，24h结果很不错的

你有没有继续检测细胞因子呢？我当时测NO完后，取同一批细胞培养上清，检测细胞因子却没有结果了，阴性和阳性没差异。可是测NO的时候阴性和阳性差异很显著的。
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18楼2014-04-21 11:08:08
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冰糖咖啡007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 天使的指纹 at 2014-04-21 11:08:08
你有没有继续检测细胞因子呢？我当时测NO完后，取同一批细胞培养上清，检测细胞因子却没有结果了，阴性和阳性没差异。可是测NO的时候阴性和阳性差异很显著的。...

跟你一样  LPS刺激NO 升高  但IL-1  TNF-A 都没测到变化
你怎么解决的?
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19楼2014-06-26 21:45:13
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冰糖咖啡007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by 阎魔瞳 at 2014-03-18 15:23:53
您好，我也是用LPS刺激raw264.7，上学期做了一个学期，就是对LPS没反应，查了好多资料，换了LPS，血清，检测NO试剂盒,这学期用的是5%的血清养的细胞，实验前进行了饥饿处理，还是不行，打电话问细胞库的老师，老师说 ...

你后来重新买细胞没？有没做出结果呀
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20楼2014-06-26 21:49:50
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