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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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1970-01-01 08:00:00
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DENGHuan

新虫 (初入文坛)

  (1)制胶:首先需要将玻璃板洗净,然后小心地将长短两块玻璃板装配到灌胶架上。分别量取15 mL 40%和65%变性剂溶液,加到两支试管中,每管加15 µL TEMED和120 µL 10%过硫酸铵,迅速摇匀之后,用两只注射针筒分别吸取高、低浓度的变性剂溶液,采用三通管分别连接这两支针筒和一只注射针头,将针头小心地插进玻璃板之间的缝隙中,针头与水平面保持垂直。使用梯度胶制备装置制备浓度梯度为40~65%的垂直胶,快速完成灌胶之后插上梳子。需要注意的是,灌胶需要尽可能保持匀速,且液体应从针头垂直流下。如不垂直,则有可能是玻璃板没有洗净所致。
   (2)电泳:在等待聚丙烯酰胺胶凝固的同时加热电泳槽中的TAE缓冲液。待聚丙烯酰胺胶凝固之后拔出梳子,将20 µL PCR扩增产物与Loading Buffer混合后加入到梳孔中并开始电泳。打开加热器和水泵,电压可设置150 V,运行时长7 h。电泳时电泳槽中TAE缓冲液的温度保持在60 oC。电泳完成后,关掉电源和系统(加热器、泵和开关)。取出温度控制仪并将它安放在Dcode防护帽架上,再将装有玻璃板的装置取出,小心地将玻璃板从装置上分离,再将短玻璃板从凝胶上移走,此时凝胶平铺在长玻璃板上。
   (3)染色:用DNA荧光染料涂抹聚丙烯酰胺凝胶表面,或将凝胶浸泡在DNA染料中,避光条件下对DNA进行荧光染色20 min,之后采用脱色摇床洗去凝胶表面的荧光染料。
   (4)检测和分析:将凝胶转移至成像系统中,首先打开白灯确定凝胶位置,再打开紫外观察条带。采用凝胶分析软件(如Quantity One)对DGGE图谱中条带的强度进行分析。
3楼2013-06-19 15:17:33
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
759986494: 金币+20, 有帮助 2013-05-26 23:02:38
DGGEDGGEDGEGGBHJJK金币啊
但行好事,莫问前程
2楼2013-05-26 23:02:18
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