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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


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10楼: Originally posted by nepwisil at 2013-05-27 19:02:40
哇你好厉害,请问怎么算出这个概率的,教一下~然后T载体mcs两端是sp6和T7的启动子,我转化用的是dh5a,不含有这两种启动子对应的RNA聚合酶...

楼主, T载体克隆长出蓝的还是长出白的菌落和sp6/T7没有任何关系.....
11楼2013-05-27 19:54:08
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nepwisil

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12楼2013-05-27 20:11:22
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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12楼: Originally posted by nepwisil at 2013-05-27 20:11:22
我知道没关系,你没明白我的意思。我插入的片段有400多,只要插入一定会发生a互补,不可能出现在蓝斑里面。因为没法转录的缘故,所以这段基因不论是哪个方向接入都不应该对菌的生长构成威胁,所以……我也不懂为什 ...

如果你的基因连进去后没有破坏β-半乳糖苷酶的阅读框, 再加上如果这个基因在β-半乳糖苷酶阅读框里没有终止子, 融合蛋白又不破坏β-半乳糖苷酶的结构. 这个菌落就是蓝色的.
13楼2013-05-27 20:20:46
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nepwisil

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14楼2013-05-28 10:15:43
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-30 21:44:16
六个阅读框里都有终止密码子? 这样的话我也想不出为什么连接的时候有方向性了.
在连T载体的时候出现这种情况是很小概率的事件, 生物实验的东东, 如果一百个人用只有两三个人出问题那我们会认为这是个好产品对吧?
15楼2013-05-28 15:36:39
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nepwisil

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16楼2013-05-30 21:23:24
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以前上实验课教的, 个人没有碰到过. 因为我用T载体时还没有出现需要考虑方向的, 所以一般都挑很少的几个白克隆就行了, 你的这种情况需要挑很多克隆才会被发现. 真心希望楼主分析一下阅读框给个反馈哈!
17楼2013-05-30 22:29:02
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mengbiotech

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主你好,我现在也遇到了同样的问题,请问你现在解决了吗?是什么原因导致连接方向一致的?
热爱生活,热爱生命
18楼2013-09-04 09:50:51
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随波逐刘

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我用的也是pgem-t载体,做的是差异基因,转化后,筛了500个克隆送测序,有一个反方向的,估计是意外吧,,,应该都是一个方向的,
19楼2013-09-04 10:56:29
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sccs1046

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我现在也遇到了这样的现象,不知道是什么原因啊!!!
20楼2013-12-30 19:00:17
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