24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1274  |  回复: 11

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永远不知道: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-18 15:51:10
楼主,我来说几句吧,希望你能解惑!可能比较长!耐心阅读!抗体的选择如下:
原理:一抗可以与要检测的蛋白特异结合,二抗可与一抗结合,同时二抗上带有特异的酶(如辣根过氧化物酶HRP,碱性磷酸酶法AP,化学发光显色法HRP ),此酶可以分解底物使胶片感光。
1.如果你的一抗使用的是单克隆抗体,因为单克隆抗体是用小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合产生的,因此分泌的抗体为单体针对单一表位,在选择二抗时,必须用抗鼠的抗体。
2.如果你是用的抗体是多克隆抗体,一般这个抗体是用原核表达的目的蛋白,免疫兔子后抽血分离血清纯化后获得的抗体,因此在二抗上必须选择抗兔子的抗体。
3.至于你的一抗是选择单克隆抗体还是多克隆,只取决于抗体是否可以买到,有的蛋白只有多克隆抗体,没有单克隆抗体。一般来说,单克隆抗体的特异性比多克隆抗体好,并且抗体稀释度也较高,但是很贵!!!!
例如:从猪身上提取出的某种抗原注入到兔子身上,兔子进行免疫出来的这种抗原为兔抗猪的,如果作为你的一抗,你的2抗就必须是抗兔的,比如羊抗兔。一般用多抗,有很多的结合位点比较好做。
简单说来,如果一抗是鼠抗的,二抗就要抗鼠的,如果一抗选择兔抗的,二抗就选用抗兔的。参考别人的做法或文献来选用鼠抗还是兔抗的一抗,然后再用相应的二抗。  
鼠抗好,条带单一,背景几乎没有,但是如果你的下一步实验要做免疫共沉淀或者做荧光双标等等,那就要考虑下,因为做那些实验时需要同时用两种抗体,而这两两种抗体不能来源于同一个种属。另外,有些抗体只能买到GOAT的或者RABIT的,没有小鼠来源。

希望能对你有所帮助!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
11楼2013-05-17 18:48:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

现在的版主,真是太有钱了!!!!

我再看看她的专业,我瞬间懂了·····
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
12楼2013-05-17 18:51:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永远不知道 的主题更新
信息提示
请填处理意见