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永远不知道

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[求助] 蛋白质印迹的抗体选择

有谁能给我解释一下，目的蛋白的抗体选择？

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1楼2013-05-16 22:02:15

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【答案】应助回帖

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永远不知道: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-18 15:51:10

楼主，我来说几句吧，希望你能解惑！可能比较长！耐心阅读！抗体的选择如下：
原理：一抗可以与要检测的蛋白特异结合，二抗可与一抗结合，同时二抗上带有特异的酶（如辣根过氧化物酶HRP，碱性磷酸酶法AP,化学发光显色法HRP ),此酶可以分解底物使胶片感光。
1.如果你的一抗使用的是单克隆抗体，因为单克隆抗体是用小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合产生的，因此分泌的抗体为单体针对单一表位，在选择二抗时，必须用抗鼠的抗体。
2.如果你是用的抗体是多克隆抗体，一般这个抗体是用原核表达的目的蛋白，免疫兔子后抽血分离血清纯化后获得的抗体，因此在二抗上必须选择抗兔子的抗体。
3.至于你的一抗是选择单克隆抗体还是多克隆，只取决于抗体是否可以买到，有的蛋白只有多克隆抗体，没有单克隆抗体。一般来说，单克隆抗体的特异性比多克隆抗体好，并且抗体稀释度也较高，但是很贵！！！！
例如：从猪身上提取出的某种抗原注入到兔子身上，兔子进行免疫出来的这种抗原为兔抗猪的，如果作为你的一抗，你的2抗就必须是抗兔的，比如羊抗兔。一般用多抗，有很多的结合位点比较好做。
简单说来，如果一抗是鼠抗的，二抗就要抗鼠的，如果一抗选择兔抗的，二抗就选用抗兔的。参考别人的做法或文献来选用鼠抗还是兔抗的一抗，然后再用相应的二抗。
鼠抗好，条带单一，背景几乎没有，但是如果你的下一步实验要做免疫共沉淀或者做荧光双标等等，那就要考虑下，因为做那些实验时需要同时用两种抗体，而这两两种抗体不能来源于同一个种属。另外，有些抗体只能买到GOAT的或者RABIT的，没有小鼠来源。

希望能对你有所帮助！