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louisa俊

银虫 (小有名气)

[求助] qPCR出了问题,做实验实在让人不淡定啊

最近做qPCR,一直出现问题!!用的是7500的荧光定量pcr仪器!!居然出现这样的信息提醒!!最终没有扩增曲线出来!

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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★
1949stone: 金币+1, 学习一下 这个会有影响么? 2013-05-22 08:24:31
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助!如何解决这个问题涅? 2013-05-29 01:58:22
提示你校正数据已经过期
2楼2013-05-15 16:51:15
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louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-05-15 16:51:15
提示你校正数据已经过期

那可以忽略这个提示吗?最近做qPCR一直没扩增曲线,但是又溶解曲线。。。也不知道哪个环节出问题
3楼2013-05-21 15:26:45
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zgb1982

木虫 (正式写手)

你确定延伸步骤加了读取荧光值吗
4楼2013-05-21 22:06:13
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love_st

金虫 (著名写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-05-15 16:51:15
提示你校正数据已经过期

应该不会有影响,ABI推荐的每隔多长时间做一次校正,但是也要看你仪器的使用率了,只要不出现太诡异的情况,我觉得影响不大
5楼2013-05-22 09:10:54
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louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by love_st at 2013-05-22 09:10:54
应该不会有影响,ABI推荐的每隔多长时间做一次校正,但是也要看你仪器的使用率了,只要不出现太诡异的情况,我觉得影响不大...

我做了好几次实验了,结果都没有P出来,其他曲线都有,就是没有扩增曲线。。。。。
6楼2013-05-27 12:36:22
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louisa俊

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zgb1982 at 2013-05-21 22:06:13
你确定延伸步骤加了读取荧光值吗

没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢!!每次都是其他曲线都有,就是没有扩增曲线,这个是为什么呢??
7楼2013-05-27 12:37:46
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-27 12:37:46
没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢!!每次都是其他曲线都有,就是没有扩增曲线,这个是为什么呢??...

4楼的意思是你在程序设置上出了差错,没有收集扩增曲线的荧光信号。比如说如果你用的荧光染料是Sybr Green,那么就应该设置72℃延伸时收集。
那个信息提示的意思2楼已经解释清楚了,这个不会扩增曲线的有或者无,顶多是定量结果有误差而已。
8楼2013-05-27 15:28:28
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


louisa俊(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 01:58:40
7500要求每半年使用他的校准试剂盒对各项荧光数据进行校准,有条件还是配一套,时间到了就做一下,不过这应该不会影响数据,所以考虑是不是你的设置有问题,导致没有扩增曲线
9楼2013-05-27 15:34:48
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-27 12:37:46
没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢!!每次都是其他曲线都有,就是没有扩增曲线,这个是为什么呢??...

就是截图里黄色圈圈的图标应该点亮。
qPCR出了问题,做实验实在让人不淡定啊
TM截图未命名.jpg

10楼2013-05-27 15:54:31
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