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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPCR出了问题，做实验实在让人不淡定啊
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louisa俊

银虫 (小有名气)

[求助] qPCR出了问题，做实验实在让人不淡定啊

最近做qPCR,一直出现问题！！用的是7500的荧光定量pcr仪器！！居然出现这样的信息提醒！！最终没有扩增曲线出来！

627440980_SendPhoto_20130515164103_1.jpg
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1楼 2013-05-15 16:48:12
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★
1949stone: 金币+1, 学习一下 这个会有影响么？ 2013-05-22 08:24:31
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！如何解决这个问题涅？ 2013-05-29 01:58:22
提示你校正数据已经过期
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2楼2013-05-15 16:51:15
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louisa俊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-05-15 16:51:15
提示你校正数据已经过期

那可以忽略这个提示吗？最近做qPCR一直没扩增曲线，但是又溶解曲线。。。也不知道哪个环节出问题
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3楼2013-05-21 15:26:45
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zgb1982

木虫 (正式写手)
你确定延伸步骤加了读取荧光值吗
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4楼2013-05-21 22:06:13
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-05-15 16:51:15
提示你校正数据已经过期

应该不会有影响，ABI推荐的每隔多长时间做一次校正，但是也要看你仪器的使用率了，只要不出现太诡异的情况，我觉得影响不大
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5楼2013-05-22 09:10:54
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louisa俊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by love_st at 2013-05-22 09:10:54
应该不会有影响，ABI推荐的每隔多长时间做一次校正，但是也要看你仪器的使用率了，只要不出现太诡异的情况，我觉得影响不大...

我做了好几次实验了，结果都没有P出来，其他曲线都有，就是没有扩增曲线。。。。。
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6楼2013-05-27 12:36:22
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louisa俊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zgb1982 at 2013-05-21 22:06:13
你确定延伸步骤加了读取荧光值吗

没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢！！每次都是其他曲线都有，就是没有扩增曲线，这个是为什么呢？？
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7楼2013-05-27 12:37:46
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-27 12:37:46
没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢！！每次都是其他曲线都有，就是没有扩增曲线，这个是为什么呢？？...

4楼的意思是你在程序设置上出了差错，没有收集扩增曲线的荧光信号。比如说如果你用的荧光染料是Sybr Green，那么就应该设置72℃延伸时收集。
那个信息提示的意思2楼已经解释清楚了，这个不会扩增曲线的有或者无，顶多是定量结果有误差而已。
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8楼2013-05-27 15:28:28
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
louisa俊(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 01:58:40
7500要求每半年使用他的校准试剂盒对各项荧光数据进行校准，有条件还是配一套，时间到了就做一下，不过这应该不会影响数据，所以考虑是不是你的设置有问题，导致没有扩增曲线
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9楼2013-05-27 15:34:48
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-27 12:37:46
没听懂哎。。。。能不能详细说一下。。非常感谢！！每次都是其他曲线都有，就是没有扩增曲线，这个是为什么呢？？...

就是截图里黄色圈圈的图标应该点亮。
qPCR出了问题，做实验实在让人不淡定啊
TM截图未命名.jpg
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10楼2013-05-27 15:54:31
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