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请教APX和CAT活性测定过程中的一些奇怪问题
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近期在做2种花卉的抗氧化酶活性，是3个比较常规基础的酶活：APX、CAT和POD，出现了一些不好解决的问题，请教大家。 APX、CAT的测定中，植物材料A的测定很顺利，重复性好，数值也处在一个合理的范围；但同样的体系中，植物B的问题不小。当将B的酶液放进分光光度计测量其活性动力学曲线的斜率时，曲线出现两个问题：（1）并非是平滑的下降曲线，而是上下波动特别严重，毫无规律，就像心电图似的。无论是跑5s、10s、25s、30s还是60s，最终的斜率值完全取决于曲线波动最后一下子是上升还是下降，偶然性太强。所以曲线斜率值应当是负值的APX和CAT，常常会因为最后一次曲线是上升波动而呈现正值。重复性就不用说了，烂的很。（2）曲线斜率值非常小，常常是小数点后第三第四位才有数值，这样的数值一般是不正确的。 前面说过是两种花卉，B在APX和CAT中出现这种问题，A很好；但在POD的测量中，B很好，材料A却出现了类似问题。究竟是什么原因呢？——估计可能是反应体系会因材料的不同而要进行调整，但文献中一般不会在具体的配试剂、用量多少、加试剂多少毫升上面写的那么细致。做了几次试验都是这种结果，在这里请教各位达人可能的原因是什么。 |
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2楼2022-02-27 21:07:35