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请教APX和CAT活性测定过程中的一些奇怪问题
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近期在做2种花卉的抗氧化酶活性,是3个比较常规基础的酶活:APX、CAT和POD,出现了一些不好解决的问题,请教大家。 APX、CAT的测定中,植物材料A的测定很顺利,重复性好,数值也处在一个合理的范围;但同样的体系中,植物B的问题不小。当将B的酶液放进分光光度计测量其活性动力学曲线的斜率时,曲线出现两个问题:(1)并非是平滑的下降曲线,而是上下波动特别严重,毫无规律,就像心电图似的。无论是跑5s、10s、25s、30s还是60s,最终的斜率值完全取决于曲线波动最后一下子是上升还是下降,偶然性太强。所以曲线斜率值应当是负值的APX和CAT,常常会因为最后一次曲线是上升波动而呈现正值。重复性就不用说了,烂的很。(2)曲线斜率值非常小,常常是小数点后第三第四位才有数值,这样的数值一般是不正确的。 前面说过是两种花卉,B在APX和CAT中出现这种问题,A很好;但在POD的测量中,B很好,材料A却出现了类似问题。究竟是什么原因呢?——估计可能是反应体系会因材料的不同而要进行调整,但文献中一般不会在具体的配试剂、用量多少、加试剂多少毫升上面写的那么细致。做了几次试验都是这种结果,在这里请教各位达人可能的原因是什么。 |
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2楼2022-02-27 21:07:35












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