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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sakura01_22

木虫 (小有名气)

[求助] WB,使用myc标签抗体出现很多杂带

构建了一个带myc标签的蛋白,转染MCF-7细胞,设置了空白组,和6个实验组(没有空载,因为质粒量不够),用CST myc-tag一抗孵育2h,结果出现很多杂带,本来只有一条带的。师姐用这个抗体特异性还挺高的,但我做就是做不出来,求教原因和解答。

图片1.jpg
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sakura01_22

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lubuddy at 2013-05-10 21:08:29
本来只有一条带是什么意思?你用的这个细胞株没有内源Myc表达么?你使用的细胞株和你师姐的一样吗?

单纯从western上避免杂带就是延长封闭时间,一抗孵育在4度下进行,同时一抗稀释液含tween。如果不是western的 ...

应该没有吧,查过文献,细胞株和师姐用的不一样,所以我打算用师姐的细胞做个对照,看是不是我操作或配制一抗有问题,一抗稀释液含有吐温,拿TBST配的。确实可以做IP,但是做IP费钱……想先做个WB鉴定一下表达情况~
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3楼2013-05-11 21:47:00
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励应助 2013-05-11 18:55:04
本来只有一条带是什么意思?你用的这个细胞株没有内源Myc表达么?你使用的细胞株和你师姐的一样吗?

单纯从western上避免杂带就是延长封闭时间,一抗孵育在4度下进行,同时一抗稀释液含tween。如果不是western的问题,那可能是蛋白降解导致多条带或者转染表达存在问题,使表达出来的蛋白都带myc但是大小不一。我记得CST的myc应该可以做IP,你可以IP纯化一下再看看有没有杂带
2楼2013-05-10 21:08:29
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