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wx1014

金虫 (初入文坛)

[求助] HPLC

使用色谱柱分离多肽物质,但没有峰的出现,可能有哪些原因啊比如流动相啊ph什么的啊我的流动相是磷酸缓冲溶液和氯化钠的溶液梯度的
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syy861230

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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wx1014: 金币+2 2013-05-07 09:36:28
首先看看这个物质的紫外吸收,貌似氨基酸类的都要进行衍生化后才有紫外吸收的吧;还有你的流动相中怎么没有有机相,会不会对色谱柱损伤太大啊
与时俱进
2楼2013-05-06 09:46:45
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七月的日子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wx1014: 金币+3 2013-05-07 09:36:15
首先,确定检测器。看这个东西用什么检测器检测,紫外要有吸收,荧光要有荧光性,用分光光度计全波长扫描290-800,找出最大吸收峰。要是看荧光用分子荧光扫描出激发波长和发射波长。要是都没有那就要衍生化才能做。检测器检不出来哪来的峰。
第二,柱子,不同的物质用不同的柱子,这些东西厂家产品介绍都有,打电话问工程师或者客服。柱子用不对峰分不开被溶剂峰盖住也看不到目标峰。
第三,流动相,必须有有机相,要不柱子受不了。你这是含盐的流动相,对柱子的保护要好,要不柱子就废了。
第四,条件,如果是峰分不开,改变流动相配比,降低流速。这样分离效果会好点。
你先试试,有问题欢迎啊。呵呵
3楼2013-05-06 10:52:34
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雨梦无声

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
标准肽咩?还是你自己的酶解肽?自己的压根可能酶解?我也正在做动物蛋白酶解
4楼2013-05-06 16:23:15
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wx1014

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 七月的日子 at 2013-05-06 10:52:34
首先,确定检测器。看这个东西用什么检测器检测,紫外要有吸收,荧光要有荧光性,用分光光度计全波长扫描290-800,找出最大吸收峰。要是看荧光用分子荧光扫描出激发波长和发射波长。要是都没有那就要衍生化才能做。 ...

我用的是紫外的,柱子是离子色谱柱,流动相是文献中查阅的没有有机相,注入样品后一点峰都没有,就是一直线,杂质峰都不出现跟走基线一样,
5楼2013-05-07 09:35:58
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