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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 亲和层析法分离多糖
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可乐7红茶

银虫 (正式写手)

[求助] 亲和层析法分离多糖

哪位大侠知道亲和层析法分离多糖的时候，如何避免洗脱糖的干扰，做出洗脱曲线？谢谢
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1楼 2013-05-05 16:08:14
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
用的什么亲和层析柱？糖结合蛋白偶联的柱子吗？如果非要用糖洗脱的话，干扰是不可避免的。可以尝试其他方法洗脱，例如高盐，极端ph，或者SDS等，如果不怕搞坏柱子的话。
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3楼2013-05-05 19:34:55
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可乐7红茶

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-05-05 19:34:55
用的什么亲和层析柱？糖结合蛋白偶联的柱子吗？如果非要用糖洗脱的话，干扰是不可避免的。可以尝试其他方法洗脱，例如高盐，极端ph，或者SDS等，如果不怕搞坏柱子的话。

是凝集素亲和层析！用其它方法就怕对柱子有损坏！
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4楼2013-05-05 20:03:50
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积跬步达千里

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 可乐7红茶 at 2013-05-05 20:03:50
是凝集素亲和层析！用其它方法就怕对柱子有损坏！...

凝集素是糖蛋白或蛋白质，这样的话用高盐，极端ph，或者SDS等进行洗脱，确实挺怕坏了柱子。
不过确实有文献就用的糖进行洗脱来分离纯化多糖，而且还做出了洗脱曲线，真不知道是怎么做到的。
我也想了解！
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5楼2013-05-05 20:25:58
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-05-06 08:40:52
可乐7红茶: 金币+6 2013-05-09 08:29:24
引用回帖:
4楼: Originally posted by 可乐7红茶 at 2013-05-05 20:03:50
是凝集素亲和层析！用其它方法就怕对柱子有损坏！...

我也是做凝集素亲和层析的。所以在这方面有点小心得吧，我想在你的实验中，亲和层析的洗脱曲线不是最关键的数据，你的关键数据应该是如何分析洗脱的糖成分，例如使用质谱or NMR鉴定之类的，所以尽管没有好的洗脱曲线（洗脱糖产生的干扰），但是凝集素结合的糖还是会在洗脱峰中，应该对你后续的数据分析影响不会太大。如果你非常看重洗脱曲线，那可以考虑之前的回复。
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6楼2013-05-05 21:26:58
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