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huanheihuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序问题

将3段PCR产物,分别为775bp,1186bp,602bp,用SOE-PCR连接起来,共长2563bp,现在想测序验证连起来的3个片段是否正确,那我是直接PCR产物测序了?还是克隆测序,克隆测序的化用T载体可以吗?测序是引物自己提供吗?是PCR时的引物吗?我刚接触分子生物学,多谢各位了,多谢
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物直接测序也可以,省时间,但是容易测到莫名其妙的东西。追求成功率,还是费点事儿,转化了,挑单克隆培养,送菌液测吧。
可以用T载啊,比如PMD-18T。
引物自己提供(自己设计的两端引物),但是你如果转化到T载,可以用T载上的通用引物,这样你就不必提供了,在引物单上注明即可。
2楼2013-04-19 10:55:41
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qsx04152006

木虫 (知名作家)

请问你soe-pcr怎么设计引物的,具体怎么做pcr的,谢谢
3楼2013-09-02 13:30:33
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