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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序问题
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huanheihuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序问题

将3段PCR产物，分别为775bp，1186bp，602bp，用SOE-PCR连接起来，共长2563bp，现在想测序验证连起来的3个片段是否正确，那我是直接PCR产物测序了？还是克隆测序，克隆测序的化用T载体可以吗？测序是引物自己提供吗？是PCR时的引物吗？我刚接触分子生物学，多谢各位了，多谢
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1楼 2013-04-19 10:12:29
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物直接测序也可以，省时间，但是容易测到莫名其妙的东西。追求成功率，还是费点事儿，转化了，挑单克隆培养，送菌液测吧。
可以用T载啊，比如PMD-18T。
引物自己提供（自己设计的两端引物），但是你如果转化到T载，可以用T载上的通用引物，这样你就不必提供了，在引物单上注明即可。
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2楼2013-04-19 10:55:41
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qsx04152006

木虫 (知名作家)
请问你soe-pcr怎么设计引物的，具体怎么做pcr的，谢谢
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3楼2013-09-02 13:30:33
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