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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 懂凝胶层析柱子的请进！
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yakir

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sephadex G-25主要是用于脱盐，缓冲液更换，可以快速更换>5K蛋白的buffer，也就意味着大于5K的所有蛋白都会一起出来，并不能起到很好的分离效果。
你的蛋白10K左右的话推荐superdex75，分离范围3K-70K，不过可能比较贵哦。。。
上样前最好把样品过一下0.22um的滤膜。
G25的颗粒比较大，不应该会堵的，流速也相当的快，除非特别脏。。你可以用0.2MNaOH洗洗。真心不推荐用来分离。
还有使用恒流泵从下面抽的话，流速过快，很容易把柱子下面一段填料抽干，推荐从柱子上面给压力。
一定注意柱子压力。。。压力过大，填料就碎了哦。。。分离效果会大打折扣哦。
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一步一步！
11楼2013-04-19 17:10:38
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 玉_凌风 at 2013-04-19 16:15:56
10000Xg离心的！不可能堵的，估计是恒流泵不行。...

如果是离心过的样品还出现速度低的情况，你可以把进样速度开大一点了，只要不超过0.1MPa就可以了，凝胶柱用G-25，不会堵的很厉害的，除非是柱子脏了
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12楼2013-04-19 21:13:10
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olivia36

新虫 (初入文坛)
可能堵了
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13楼2014-04-17 15:46:57
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