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yakir

银虫 (小有名气)


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sephadex G-25主要是用于脱盐,缓冲液更换,可以快速更换>5K蛋白的buffer,也就意味着大于5K的所有蛋白都会一起出来,并不能起到很好的分离效果。
你的蛋白10K左右的话推荐superdex75,分离范围3K-70K,不过可能比较贵哦。。。
上样前最好把样品过一下0.22um的滤膜。
G25的颗粒比较大,不应该会堵的,流速也相当的快,除非特别脏。。你可以用0.2MNaOH洗洗。真心不推荐用来分离。
还有使用恒流泵从下面抽的话,流速过快,很容易把柱子下面一段填料抽干,推荐从柱子上面给压力。
一定注意柱子压力。。。压力过大,填料就碎了哦。。。分离效果会大打折扣哦。
一步一步!
11楼2013-04-19 17:10:38
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wolfman840

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 玉_凌风 at 2013-04-19 16:15:56
10000Xg离心的!不可能堵的,估计是恒流泵不行。...

如果是离心过的样品还出现速度低的情况,你可以把进样速度开大一点了,只要不超过0.1MPa就可以了,凝胶柱用G-25,不会堵的很厉害的,除非是柱子脏了
12楼2013-04-19 21:13:10
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olivia36

新虫 (初入文坛)

可能堵了
13楼2014-04-17 15:46:57
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