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玉_凌风

新虫 (小有名气)

[交流] 懂凝胶层析柱子的请进! 已有6人参与

最近过凝胶柱,样品为多肽,恒流泵速度也适中,但是就是流苏特别慢,凝胶柱下端的滴速?这个该怎么调节呢,求指点一下。。。
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yakir

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
sephadex G-25主要是用于脱盐,缓冲液更换,可以快速更换>5K蛋白的buffer,也就意味着大于5K的所有蛋白都会一起出来,并不能起到很好的分离效果。
你的蛋白10K左右的话推荐superdex75,分离范围3K-70K,不过可能比较贵哦。。。
上样前最好把样品过一下0.22um的滤膜。
G25的颗粒比较大,不应该会堵的,流速也相当的快,除非特别脏。。你可以用0.2MNaOH洗洗。真心不推荐用来分离。
还有使用恒流泵从下面抽的话,流速过快,很容易把柱子下面一段填料抽干,推荐从柱子上面给压力。
一定注意柱子压力。。。压力过大,填料就碎了哦。。。分离效果会大打折扣哦。
一步一步!
11楼2013-04-19 17:10:38
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tiu007

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-04-18 16:36:11
径高比装的是多少,还有用的凝胶型号影响都很大的,改用AKTA系统中压泵也行!恒流泵不行的
2楼2013-04-18 15:25:39
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玉_凌风

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tiu007 at 2013-04-18 15:25:39
径高比装的是多少,还有用的凝胶型号影响都很大的,改用AKTA系统中压泵也行!恒流泵不行的

凝胶型号G-25,径高比1:30。实验室有个FPLC,老古董不能用了,悲催。
学习
3楼2013-04-18 19:24:35
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果不是预装柱,那就自己买个蠕动泵,买个检测器就可以了,最好再配一台纸记录仪!
I am not a hero , but I served with heroes!
4楼2013-04-19 09:18:47
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