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求助：苯酚－硫酸法测多糖失败
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请虫友帮忙,非常感谢 我用以下方法几次在室温正常光照下测定多糖含量,结果标准品和样品在上机时均出现数值不稳,结果不可信.(说明:样品标准品上机时颜色深黑色) 很多人推荐苯酚－硫酸法，可我为什么总不成功呢？  操作如下: 1.1 称取标准葡聚糖20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.4 ml、1.6 ml及1.8 ml，各以蒸馏水补至2.0ml ,然后加入6%苯酚1.0ml以及浓硫酸5.0ml，静置10分钟，摇匀，室温放置20分钟后，于490nm测光密度。用2.0ml水按同样显色操作为空白，以横坐标为多糖为微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 1.2 称取样品50g，加三倍体积蒸馏水，80℃提取2小时，重复二次，合并三次提取离心上清夜，旋转蒸发浓缩至一定体积，流水透析过夜后，继续用蒸馏水透析2小时，取5ml透析液，定容至250ml，测定时吸取该液0.3 ml、0.5 ml、1.0 ml。按上述步骤操作，测定光密度，以标准曲线计算多糖含量。 |
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