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DNase I 怎么配液? 剂量该用多少?
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chokfan
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DNase I 怎么配液? 剂量该用多少?
请问各位大神,我想进行去细胞化大鼠肝脏的DNA消化,买了15KU,我想问下大家怎么配液? 剂量该用多少? 大鼠肝脏质量为(11.14±1.55)g;DNA dry weight 大约为 2500微克/克
感谢各位回复!
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2013-04-14 10:16:16
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2013-04-14 14:37:13
你要看看你买的酶是怎么计算酶活力单位的,例如1U可以消化30ug,就换算用量。如果是干粉的话看看那个酶的说明书。因为不同公司的稍微有点差异。我买来就是液体的,基本就是50%甘油和一些盐离子
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2013-04-14 10:46:04
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2楼
:
Originally posted by
sxxuan
at 2013-04-14 10:46:04
你要看看你买的酶是怎么计算酶活力单位的,例如1U可以消化30ug,就换算用量。如果是干粉的话看看那个酶的说明书。因为不同公司的稍微有点差异。我买来就是液体的,基本就是50%甘油和一些盐离子
...
谢谢你的回复! 我买的是Sigma的液体酶,那我应该怎么配?
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3楼
2013-04-14 10:54:24
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chokfan
at 2013-04-14 10:54:24
谢谢你的回复! 我买的是Sigma的液体酶,那我应该怎么配?...
液体酶不是直接用于消化DNA吗?还配什么啊?
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2013-04-14 11:00:45
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4楼
:
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cicelyzh
at 2013-04-14 11:00:45
液体酶不是直接用于消化DNA吗?还配什么啊?...
因为我是肝脏动脉灌注进行消化,需要进行循环灌注消化,大概需要200ml的1*PBS液,所以我不太清楚这个稀释过程需要注意什么步骤?
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5楼
2013-04-14 11:18:35
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5楼
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chokfan
at 2013-04-14 11:18:35
因为我是肝脏动脉灌注进行消化,需要进行循环灌注消化,大概需要200ml的1*PBS液,所以我不太清楚这个稀释过程需要注意什么步骤?...
一般的DNaseI工作时需要毫摩尔浓度级别的镁离子和钙离子,因为你用PBS稀释,钙离子与磷酸根不相容,你至少需要添加一些MgCl2。
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6楼
2013-04-14 23:56:12
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chokfan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助!
2013-04-28 17:27:40
已经是液体的,那说明书上应该有写每微升的酶的活力单位,而这个活力单位可以消化多少量的DNA。一般都会附送缓冲液的,基本都是10*的buffer,就按比例去加就可以了。你已经算好了大概含有多少的DNA量,现在就需要根据酶活力蛋白,把200ml的体系算出来,就知道该加多少的酶了
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2013-04-15 10:51:41
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