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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNase I 怎么配液？ 剂量该用多少？
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chokfan

新虫 (初入文坛)

[求助] DNase I 怎么配液？ 剂量该用多少？

请问各位大神，我想进行去细胞化大鼠肝脏的DNA消化，买了15KU，我想问下大家怎么配液？ 剂量该用多少？  大鼠肝脏质量为（11．14±1．55）g;DNA dry weight 大约为 2500微克/克


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1楼 2013-04-14 10:16:16
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-14 14:37:13
你要看看你买的酶是怎么计算酶活力单位的，例如1U可以消化30ug，就换算用量。如果是干粉的话看看那个酶的说明书。因为不同公司的稍微有点差异。我买来就是液体的，基本就是50%甘油和一些盐离子

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-04-14 10:46:04
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chokfan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2013-04-14 10:46:04
你要看看你买的酶是怎么计算酶活力单位的，例如1U可以消化30ug，就换算用量。如果是干粉的话看看那个酶的说明书。因为不同公司的稍微有点差异。我买来就是液体的，基本就是50%甘油和一些盐离子
...

谢谢你的回复！   我买的是Sigma的液体酶，那我应该怎么配？
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3楼2013-04-14 10:54:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by chokfan at 2013-04-14 10:54:24
谢谢你的回复！   我买的是Sigma的液体酶，那我应该怎么配？...

液体酶不是直接用于消化DNA吗？还配什么啊？
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4楼2013-04-14 11:00:45
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chokfan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 11:00:45
液体酶不是直接用于消化DNA吗？还配什么啊？...

因为我是肝脏动脉灌注进行消化，需要进行循环灌注消化，大概需要200ml的1*PBS液，所以我不太清楚这个稀释过程需要注意什么步骤？
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5楼2013-04-14 11:18:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by chokfan at 2013-04-14 11:18:35
因为我是肝脏动脉灌注进行消化，需要进行循环灌注消化，大概需要200ml的1*PBS液，所以我不太清楚这个稀释过程需要注意什么步骤？...

一般的DNaseI工作时需要毫摩尔浓度级别的镁离子和钙离子，因为你用PBS稀释，钙离子与磷酸根不相容，你至少需要添加一些MgCl2。
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6楼2013-04-14 23:56:12
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
chokfan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-28 17:27:40
已经是液体的，那说明书上应该有写每微升的酶的活力单位，而这个活力单位可以消化多少量的DNA。一般都会附送缓冲液的，基本都是10*的buffer，就按比例去加就可以了。你已经算好了大概含有多少的DNA量，现在就需要根据酶活力蛋白，把200ml的体系算出来，就知道该加多少的酶了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
7楼2013-04-15 10:51:41
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