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求助：有哪位老师知道高效液相色谱荧光检测器的具体操作规程？急需帮助！谢谢！
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| 有哪位老师知道高效液相色谱荧光检测器的具体操作规程？我以前只做过紫外的还有电化学检测器的，现在急用荧光检测器的。请教各位老师荧光检测器与紫外检测器在操作步骤上有什么区别？还有什么需要注意的事项？谢谢大家！ |
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lflin31
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三、检测器的类型 1. 紫外检测器 检测原理：依据郎布－比耳定律 可变波长检测器采用氘灯作光源，波长在190～600nm范围可调。光源发出的光经过透镜聚焦在入口狭缝上，光透过狭缝经过反射到达光栅，光栅把190～600范围的光分成不同波长的单色光后，把某一波长的单色光经过平面镜反射至光分束器。透过分束器的光经过样品池最终到达样品光电二极管检测器倍检测；被光分束器反射的光到达参比检测器被检测。紫外检测器的这种设计，使得它在某一时刻只能采集某一特定波长。为了对色谱过程中各个峰都获得最灵敏的检测，光栅可以编程控制，便于采集过程中变化波长。 紫外检测器适用范围 紫外检测器不是通用型检测器，可以检测有∏键及非共用电子对的物质，如烯烃，芳烃以及含C＝O，C＝S，N＝O，N＝N基团的化合物，这些化合物在紫外区都有吸收。 4 荧光检测器 检测原理：当多原子分子吸收光量子时，电子从基态的最低振动能级跃迁到高电子能态。然 后分子通过无辐射过程松弛到一种激发态的最低振动能级，并在回到基态时发射光子，这个过程称之为荧光。由于发射前后的振动松弛，荧光发射的能量总低于吸收的能量。因此溶液中溶质分子的荧光光谱与吸收光谱相比总出现在长波长区。 在色谱条件下，由于溶质浓度很低，荧光强度I f与激发光强度I 0的关系可以近似写成： I f ＝2.3Φf I0ε Lc Φf量子效率; ε- 溶质摩尔吸光系数; L-光程长(即池体长度)，c为样品浓度。 此式是荧光检测器定量的基础。通过增加激发光强度 I0 ，可以提高检测器的灵敏度。检测限可达1pg(10-12 g)，线性为浓度的2～3个数量级。 从氘灯或氙灯发出的激发光首先聚焦在第一个光栅，此光栅通过转动选择需要的激发波长聚焦在流动池。样品经过激发光的照射后发出荧光，荧光经过聚焦和反射，到达第二个光栅，第二个光栅经过转动选择检测合适波长的荧光反射到检测器检测。 使用荧光检测器时，要注意流动相组成对荧光发射的影响。溶剂自身的极性、pH值、氧的含量、溶剂的氢键作用等都会影响荧光的发射强度或发射波长。溶剂中的杂质，特别是氧的含量，可能完全抑制低荧光化合物发射的信号，因而溶剂需要脱氧。 应用范围 荧光检测器用于检测能够发射荧光的化合物，但本身具有荧光特性的有机或者无机化合物很少，可以通过衍生的方法使原来不发荧光的化合物发射荧光，进而对其进行检测。下面表格列出某些固有发射荧光的物质。 好多信息，收索一下。。慢慢看！ |
7楼2007-09-25 22:36:37
kelg
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2楼2007-09-21 14:52:04
leonumn
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3楼2007-09-21 17:22:25
电泳
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