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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教：如何从富集混菌中分离目标活性单菌？
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lidanye

金虫 (小有名气)

[求助] 请教：如何从富集混菌中分离目标活性单菌？

最近试图从环境样品中分离嗜热产酒精细菌，高温富集过后，混菌培养物的主要产物为酒精，副产物为少量乳酸和醋酸，但是试图涂平板分离单菌落的时候遇到了问题，平板上长出的单菌落在液体培养基中培养2天过后主要产物均为乳酸，仅有微量酒精。请有经验的虫友指点，非常感谢！
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1楼 2013-04-09 11:13:51
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lhd2004

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lidanye: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复。事实上目前正是这样做的，问题在于这样分离得到的菌全部都是乳酸菌，而非设想的酒精菌 2013-04-09 16:07:35
将混合菌种做10倍稀释涂板，多涂几个梯度，得到长满单个菌落的平板。镜检看是否纯化。如纯化了，那么将每个菌落分别液体发酵培养，逐一验证有产物，注意设菌混合实验作为对照。
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努力做好科研！
2楼2013-04-09 14:01:00
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馨沁

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lidanye: 金币+19, ★有帮助, 谢谢回复。这种可能性倒是真没想过。不过在混菌中，如果在产酒精后继续培养1-2天，乳酸浓度也会大幅上升，涨幅高过酒精，但是酒精没有被转化。所以很有可能是混菌中的乳酸菌是fast-growing bacteria，最终overtake酒精菌了。烦恼啊 2013-04-10 08:43:59
zhangxingc: 金币-17, 由于楼主错将金币多发放给你，应楼主请求扣除多发的17个金币，谢谢理解，欢迎常到微生物版 2013-04-10 12:54:17
这是筛菌筛偏了 问题可能出在混菌培养时有的菌株以代谢产物乳酸为底物了进一步将乳酸分解成酒精了，可以试试分离出的单菌株 添加乳酸继续培养
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3楼2013-04-09 21:51:19
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馨沁

木虫 (小有名气)
你这个分离的是酵母菌吧 换一下YEPD培养基重新筛选一下
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4楼2013-04-11 21:25:44
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lidanye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 馨沁 at 2013-04-11 21:25:44
你这个分离的是酵母菌吧 换一下YEPD培养基重新筛选一下

不是的，是细菌
酵母菌一般耐不了五六十度的高温
从混菌镜检来看，也没看到有酵母，多为杆状细菌
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5楼2013-04-12 10:59:36
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