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工程菌诱导后不生长
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各位虫友，最近实验遇到如下问题： 一个蛋白分子70KDa，刚开始做过密码子优化，不表达，后又采用原始序列，表达了，但是诱导后菌不生长，菌量很低，上清有蛋白且有活性，包涵体也很多。 请教各位，如何让菌诱导后持续生长呢？是因为蛋白分子量大吗？ |
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maxiaoqiang
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
liuheluo: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢，正在考虑更换宿主菌 2013-04-03 11:31:11
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:41:57
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你的蛋白分子量不算大 我们表达这种大小的蛋白很正常的 主要可能是表达的蛋白对菌体有毒害作用 致使菌体生长受到影响 可以试试其他可以表达毒性蛋白的宿主菌 采用严格本底控制 未经过诱导不表达 另外诱导时候可以使用低浓度乳糖诱导 同时低温可能会减少包涵体的表达 同时促进菌体生长 因为乳糖本身也是一种碳源 此外，可以尝试其他载体，比如带有促进可溶性的标签载体，pet32a 或者PMAL-P2X麦芽糖融合蛋白等载体 也有可能会改变表达的状况 祝成功  |
2楼2013-04-03 10:31:48