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shasha沙

铜虫 (小有名气)

[求助] 漆酶

通过降解实验发现实验室一株假单胞菌共代谢降解芳香族化合物，进而确定了起作用的酶在胞外，也就是外分泌酶，结合文献猜测可能是漆酶在起作用，所以就用ABTS测试了一下漆酶的活性，发现是有漆酶活性的，但是在胞外分离物中加入EDTA后，降解酶的活性没有被抑制，跟对照组降解效果差不多。测试加入EDTA后的漆酶酶活，酶活反而有一点点增加，这种现象应该怎么解释呢？如果是漆酶的话，加入络合剂EDTA，活性应该受到抑制才对啊，用ABTS测试的酶活结果反而有小幅度的升高。是不是还有其他酚氧化酶的可能，怎么进一步验证呢？
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lpl0032

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1楼 2013-04-03 08:58:06
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lpl0032
送鲜花一朵
2楼2013-04-03 11:02:03
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windmaple

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
shasha沙: 金币+2, ★有帮助 2013-04-07 09:00:57
你EDTA加入的浓度是多少？ 10mM左右对很多漆酶基本不存在抑制作用的，至于些微的促进作用可能是测量误差，尤其是在粗酶液中，还可能是除去了本来存在的抑制作用。叠氮钠（0.1mM）就会完全抑制漆酶酶活，这个可以试一试，但是它比较广谱。另外，现在报道比较多的漆酶特异性抑制剂是曲酸，可能会有抑制作用。
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3楼2013-04-06 13:45:19
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shasha沙

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by windmaple at 2013-04-06 13:45:19
你EDTA加入的浓度是多少？ 10mM左右对很多漆酶基本不存在抑制作用的，至于些微的促进作用可能是测量误差，尤其是在粗酶液中，还可能是除去了本来存在的抑制作用。叠氮钠（0.1mM）就会完全抑制漆酶酶活，这个可以试一 ...

可是我看文献好多人都做的0.1mM的EDTA对漆酶都有抑制作用~我加了10mM，15mM都没有抑制作用。EDTA实验使用乙二胺四乙酸还是二钠盐呢？
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4楼2013-04-07 09:00:39
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windmaple

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
shasha沙: 金币+3 2013-04-16 14:04:21
引用回帖:
4楼: Originally posted by shasha沙 at 2013-04-07 09:00:39
可是我看文献好多人都做的0.1mM的EDTA对漆酶都有抑制作用~我加了10mM，15mM都没有抑制作用。EDTA实验使用乙二胺四乙酸还是二钠盐呢？...

EDTA或者EDTA·2Na都ok 有文献报道它对漆酶活性有影响 但同时也有报道说没大影响的 总之它作为一种铜离子络合剂 并不能作为漆酶的特异性抑制剂~~ 加入之后没有抑制作用并不能说明这就不是漆酶。
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5楼2013-04-08 14:16:26
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