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青枯菌（或者相似菌）电转问题，急！还请大家帮帮忙
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最近在做一株菌的电转，是与青枯菌（Ralstonia）同属的菌，想转入GFP质粒，进行荧光检测，可是做了很多次都不成功啊，还请大家了解的帮帮忙，或者做过相似的阴性菌也说几句话吧~ 我的方法是： OD600=0.4-0.6（大概8-10h）的时候冰浴30min，6000rpm离心6min，用无菌水洗3-4次，最后用1mL无菌水重悬。 每200 uL感受态分装到电转杯中，加2-5 uL质粒，电转，1.5kV，2.0kV，2.5kV，3.0kV都试过，之后加LB 80rpm过夜复苏，涂布。 不管怎么样，还是希望大家交流一下，如果真的有帮助的，我会加金币。才来这里，不知道一般是给多少金币的。谢谢大家！ |
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【答案】应助回帖
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熊孩子飞: 金币+10, ★★★很有帮助, 十分感谢 2013-04-19 04:17:35
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| 一般去10mL培养液，10mL的预冷无菌水洗两遍，最后一遍用10%甘油洗，再用200uL10%甘油,100uL分装，你试试？复苏一般用SOC，怕离子浓度高，就稀释5倍，复苏的话3h就够了，怎么要过夜呀？还有就是想问你你GFP质粒带那个抗生素标记？有氨苄或者壮观霉素的吗？看到后速回，想交流一下！lebora@sina.com |
2楼2013-04-17 22:00:32
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