| 查看: 767 | 回复: 1 | |||
[求助]
青枯菌（或者相似菌）电转问题，急！还请大家帮帮忙
|
|
最近在做一株菌的电转，是与青枯菌（Ralstonia）同属的菌，想转入GFP质粒，进行荧光检测，可是做了很多次都不成功啊，还请大家了解的帮帮忙，或者做过相似的阴性菌也说几句话吧~ 我的方法是： OD600=0.4-0.6（大概8-10h）的时候冰浴30min，6000rpm离心6min，用无菌水洗3-4次，最后用1mL无菌水重悬。 每200 uL感受态分装到电转杯中，加2-5 uL质粒，电转，1.5kV，2.0kV，2.5kV，3.0kV都试过，之后加LB 80rpm过夜复苏，涂布。 不管怎么样，还是希望大家交流一下，如果真的有帮助的，我会加金币。才来这里，不知道一般是给多少金币的。谢谢大家！ |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有205人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 青枯菌半选择性培养基---TTC培养基，你信几分？
已经有13人回复
- 【求助/交流】枯草芽孢杆菌电转化
已经有17人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:23:18
熊孩子飞: 金币+10, ★★★很有帮助, 十分感谢 2013-04-19 04:17:35
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:23:18
熊孩子飞: 金币+10, ★★★很有帮助, 十分感谢 2013-04-19 04:17:35
| 一般去10mL培养液，10mL的预冷无菌水洗两遍，最后一遍用10%甘油洗，再用200uL10%甘油,100uL分装，你试试？复苏一般用SOC，怕离子浓度高，就稀释5倍，复苏的话3h就够了，怎么要过夜呀？还有就是想问你你GFP质粒带那个抗生素标记？有氨苄或者壮观霉素的吗？看到后速回，想交流一下！lebora@sina.com |
2楼2013-04-17 22:00:32
