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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » β半乳糖酶分解X-gal 后产生的蓝色物质若用分光光度计测其最大吸收峰是多少？
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huyan0817

木虫 (正式写手)

[求助] β半乳糖酶分解X-gal 后产生的蓝色物质若用分光光度计测其最大吸收峰是多少？

哪位大神知道，麻烦说下！谢谢！！！
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1楼 2013-03-27 19:48:13
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-03-28 07:37:29
有点好奇楼主怎么要做这个？一般蓝白班筛选，能识别出颜色变化就可以了，没见到具体测的。实在需要测定结果，自己扫个上清液全波长吧
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2楼2013-03-28 00:46:42
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-03-28 00:46:42
有点好奇楼主怎么要做这个？一般蓝白班筛选，能识别出颜色变化就可以了，没见到具体测的。实在需要测定结果，自己扫个上清液全波长吧

我们想用来检测蛋白质的表达量，因为荧光检测太贵，所有想用蓝白斑筛选来替换，节约成本
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3楼2013-03-28 13:16:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2013-03-28 13:16:01
我们想用来检测蛋白质的表达量，因为荧光检测太贵，所有想用蓝白斑筛选来替换，节约成本...

没见过这样的做法，楼主能否把参考文献分享一下？
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4楼2013-03-28 17:14:23
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-03-28 17:14:23
没见过这样的做法，楼主能否把参考文献分享一下？...

就是一个想法而已，就是在目标蛋白前面加上一个β-半乳糖酶基因，目标蛋白表达多少β-半乳糖酶也相应表达多少，利用其分解底物X-gal显色，根据颜色深浅来间接反映目标蛋白的表达量。所以想知道蓝色沉淀物质的最大吸收峰。
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5楼2013-03-28 19:30:30
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

这个想法很有意思，但楼主怎么确定产生的蓝色物质多少与蛋白表达量线性相关呢？在这个测定过程中，菌生长速度，蛋白表达水平，酶催化反应速度都会影响结果，需要考察的因素比较多。
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6楼2013-03-29 00:07:03
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by starseacow at 2013-03-29 00:07:03
这个想法很有意思，但楼主怎么确定产生的蓝色物质多少与蛋白表达量线性相关呢？在这个测定过程中，菌生长速度，蛋白表达水平，酶催化反应速度都会影响结果，需要考察的因素比较多。

我知道，所以得控制酶催化反应的时间，底物也要足够，另外我们这个想法主要是为了大概测定下我们构建的载体的蛋白表达量及蛋白纯化效率，不要求太过精确。
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7楼2013-03-29 10:04:09
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by huyan0817 at 2013-03-29 10:04:09
我知道，所以得控制酶催化反应的时间，底物也要足够，另外我们这个想法主要是为了大概测定下我们构建的载体的蛋白表达量及蛋白纯化效率，不要求太过精确。...

我估计这个没人搞过，还是建议你做个预实验，设置不同蛋白表达水平组，取上清扫一下全波长，看看哪个波长吸光度与蛋白表达相关
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8楼2013-03-29 18:54:23
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huyan0817

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by starseacow at 2013-03-29 18:54:23
我估计这个没人搞过，还是建议你做个预实验，设置不同蛋白表达水平组，取上清扫一下全波长，看看哪个波长吸光度与蛋白表达相关...

好的。。。谢谢建议。。
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9楼2013-03-29 21:55:57
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