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forever909

银虫 (小有名气)

[求助] 暗室曝光的时候发光液与膜接触后,发光液就变亮是什么原因

最近在做暗室曝光,发现个严重的问题,就是每次在做的时候,只要把发光液涂抹到膜上,然后发光也就亮了,很亮很亮,不知道是什么原因,我以为,是洗膜时间不够,我就洗了四次,每次十分钟,可是还是那样的,有没有谁能帮着解决一下呢,先谢谢了
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快乐是最重要的。。。。。。
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-28 15:55:07
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 15:17:46
告诉你个简单而且经济的方法。其实western最后曝光的时候,根本不需要把整个膜泡到底物里面。你可以按照我说的这样做:
1.准备一块干净的保鲜膜,剪裁成合适的大小
2.将膜上的buffer用吸水纸吸掉,将膜放到保鲜膜的下半部分
3.将大约200ul的底物用枪均匀的打到膜上
4.将保鲜膜的上半部分,慢慢地折向膜,使底物涂抹均匀。可以反复将上层的保鲜膜重新拿起来,再重新铺上。反复2到三次。
5.曝光
这种方法最大的好处就是简单,极其节省底物,我相信老板肯定会高兴的。但是最大的隐患在于,一定要保证底物涂抹均匀。
祝你好运
天道酬勤
7楼2013-03-24 15:19:49
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taomm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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forever909(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 15:18:45
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 15:19:25
洗的时间不够,二抗浓度过高。这样会导致曝光后全是黑片,而且荧光会很快淬灭掉。考虑降低抗体使用浓度,洗液里加千分之一吐温,增加洗涤次数和时间。
8楼2013-03-25 14:28:10
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普通回帖

kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

爱莫能助,可能是人长得太帅了
药理毒理
2楼2013-03-24 09:33:56
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forever909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kk1424 at 2013-03-24 09:33:56
爱莫能助,可能是人长得太帅了

那你就是过来转转的呗
快乐是最重要的。。。。。。
3楼2013-03-24 09:45:38
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗体特异性不好吧?同时有没有砸别的抗体?也是这样?
4楼2013-03-24 10:23:04
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kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

是啊,我不一直坐在你的左后方么。。。。。。。
药理毒理
5楼2013-03-24 10:24:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


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forever909(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 15:18:58
发光的原理是酶促反应,酶在膜上,底物在ECL里面。用ECL浸泡膜之后当然会使ECL里面的luminol发出荧光。关键是暴光的时候需要把膜从ECL拿出来,并且除去表面多余的液体才压film的吧。
6楼2013-03-24 11:42:27
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:55:21
1.封闭时间不够,适当延长。
2.一抗、二抗浓度过高,增加稀释比例。
3.换个发光液。
4.实验过程中保证膜的湿润。
9楼2013-03-26 09:59:52
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forever909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by taomm at 2013-03-25 14:28:10
洗的时间不够,二抗浓度过高。这样会导致曝光后全是黑片,而且荧光会很快淬灭掉。考虑降低抗体使用浓度,洗液里加千分之一吐温,增加洗涤次数和时间。

我一觉得是这些问题的,然后我把二抗的浓度稀释了,洗膜时间增加到了四次,每次十分钟,我的洗液里一直有加土温的
快乐是最重要的。。。。。。
10楼2013-03-28 08:41:37
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