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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 暗室曝光的时候发光液与膜接触后，发光液就变亮是什么原因
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forever909

银虫 (小有名气)

[求助] 暗室曝光的时候发光液与膜接触后，发光液就变亮是什么原因

最近在做暗室曝光，发现个严重的问题，就是每次在做的时候，只要把发光液涂抹到膜上，然后发光也就亮了，很亮很亮，不知道是什么原因，我以为，是洗膜时间不够，我就洗了四次，每次十分钟，可是还是那样的，有没有谁能帮着解决一下呢，先谢谢了
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快乐是最重要的。。。。。。
1楼 2013-03-24 08:56:17
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回帖置顶 ( 共有2个 )

wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-28 15:55:07
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 15:17:46
告诉你个简单而且经济的方法。其实western最后曝光的时候，根本不需要把整个膜泡到底物里面。你可以按照我说的这样做：
1.准备一块干净的保鲜膜，剪裁成合适的大小
2.将膜上的buffer用吸水纸吸掉，将膜放到保鲜膜的下半部分
3.将大约200ul的底物用枪均匀的打到膜上
4.将保鲜膜的上半部分，慢慢地折向膜，使底物涂抹均匀。可以反复将上层的保鲜膜重新拿起来，再重新铺上。反复2到三次。
5.曝光
这种方法最大的好处就是简单，极其节省底物，我相信老板肯定会高兴的。但是最大的隐患在于，一定要保证底物涂抹均匀。
祝你好运
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天道酬勤
7楼2013-03-24 15:19:49
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taomm

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
forever909(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 15:18:45
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 15:19:25
洗的时间不够，二抗浓度过高。这样会导致曝光后全是黑片，而且荧光会很快淬灭掉。考虑降低抗体使用浓度，洗液里加千分之一吐温，增加洗涤次数和时间。
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8楼2013-03-25 14:28:10
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普通回帖

kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
爱莫能助，可能是人长得太帅了
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药理毒理
2楼2013-03-24 09:33:56
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forever909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kk1424 at 2013-03-24 09:33:56
爱莫能助，可能是人长得太帅了

那你就是过来转转的呗
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快乐是最重要的。。。。。。
3楼2013-03-24 09:45:38
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crystalfrog

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗体特异性不好吧？同时有没有砸别的抗体？也是这样？
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4楼2013-03-24 10:23:04
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kk1424

主管区长 (著名写手)

中药研究者

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
是啊，我不一直坐在你的左后方么。。。。。。。
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药理毒理
5楼2013-03-24 10:24:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
forever909(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 15:18:58
发光的原理是酶促反应，酶在膜上，底物在ECL里面。用ECL浸泡膜之后当然会使ECL里面的luminol发出荧光。关键是暴光的时候需要把膜从ECL拿出来，并且除去表面多余的液体才压film的吧。
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6楼2013-03-24 11:42:27
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:55:21
1.封闭时间不够，适当延长。
2.一抗、二抗浓度过高，增加稀释比例。
3.换个发光液。
4.实验过程中保证膜的湿润。
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9楼2013-03-26 09:59:52
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forever909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by taomm at 2013-03-25 14:28:10
洗的时间不够，二抗浓度过高。这样会导致曝光后全是黑片，而且荧光会很快淬灭掉。考虑降低抗体使用浓度，洗液里加千分之一吐温，增加洗涤次数和时间。

我一觉得是这些问题的，然后我把二抗的浓度稀释了，洗膜时间增加到了四次，每次十分钟，我的洗液里一直有加土温的
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快乐是最重要的。。。。。。
10楼2013-03-28 08:41:37
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