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刀巴广林鬼

木虫 (小有名气)

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[求助] 有关脱氧核糖的羟自由基清除实验的问题

本人最近在做脱氧核糖羟自由基清除实验，参考的文献是Okezie I. A. Deoxyribose assay for detecting hydroxyl radicals.Methods in Enzymology, 1994, 233: 57-66.
根据上面的方法，本人按这样的顺序加入试剂：PBS+FeCl3/EDTA+脱氧核糖+样品（以Trolox为阳性对照）+H2O2，最后加入VitC引发反应；后面用TBA和TCA显色。
但是很奇怪的就是，几乎每次做的结果都是颜色由浅至深，而合理的结果应该是由深至浅。
还有另外一个问题，这个实验要求样品要溶于水，但是不溶于水的样品可以做么？我考察过甲醇、乙醇、DMSO、THF、DMF、丙酮和乙腈作为溶剂，发现它们都会使阳性对照组褪至无色甚至变成其他颜色，请问有人遇到这种情况并解决了么？我看很多文献还有学位论文都报道挥发油做羟自由基清除实验，都是用甲醇乙醇去溶解，但我觉得应该不可能吧？
真心求助，谢谢！

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