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8楼: Originally posted by wxl.1989822 at 2013-03-23 21:40:06
楼主我和你遇到过相似的情况不是没有连进去也不是没有切开而是太少了看不见 pET28a是表达载体本身克隆数就低有以下几个解决办法：
1：提质粒的时候多取点菌液，6ml吧
2：酶切的时候多切点，我切的20ul不加水 ...

我有测序的，是空载体。除了开头几十个碱基和末尾几十个碱基，其余都是空载体。应该是没有连上。

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11楼2013-03-24 09:30:00

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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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【答案】应助回帖

引用回帖:

10楼: Originally posted by 15376763881 at 2013-03-24 09:27:20
非常感谢您啊我这也怀疑是不是一种酶不好用了,因为ecor1不是新买的，上届师姐师兄留下的，xho1是新买的。我也想问的问题就是，如果一个酶切开了而另一个酶没有切开，发生载体自连，像您说的那样会长菌？（我的长了 ...

两个酶单切载体看看，是不是酶的问题
你说的引物问题，不要相信别人，需要你自己去认真地思考，核实
如果出了错误，别人不会为你浪费的时间和精力承担责任

引物设计需要注意的问题，比如，基因内部有没有ecori 和xhoi 位点
有没有保护碱基，是不是能正确的连接到载体上【ORF 问题】

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12楼2013-03-25 10:28:50

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