24小时热门版块排行榜    

查看: 1515  |  回复: 6

shangrila911

新虫 (小有名气)

[交流] 末端转移酶加的是dATP,之后可以用olige dT 为上游引物进行PCR吗? 已有2人参与

如上述,我这么做 一直都没有带?求解释
回复此楼
一切都会好的!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
末端转移酶是一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3′-OH基上的酶。如果你加的是dATP,那么末端转移酶会在3‘-OH端加上一系列的A,之后可以用olige dT 进行扩增,但olige dT 是3’端引物也即是下游引物。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-03-18 13:25:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangrila911

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-18 13:25:27
末端转移酶是一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3′-OH基上的酶。如果你加的是dATP,那么末端转移酶会在3‘-OH端加上一系列的A,之后可以用olige dT 进行扩增,但olige dT 是3’端引物也即是下游引物。

3'的序列是已知的,反转录用的引物是特异性的,Olige dT只能是下游引物吗?

无标题.png

一切都会好的!
3楼2013-03-18 15:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangrila911

新虫 (小有名气)

哦,上面的adapter primer标错了
一切都会好的!
4楼2013-03-18 15:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-03-18 15:00:51
3'的序列是已知的,反转录用的引物是特异性的,Olige dT只能是下游引物吗?

无标题.png
...

这种情况就可以扩增mRNA序列的5‘序列啦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-03-18 19:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangrila911

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-18 19:10:14
这种情况就可以扩增mRNA序列的5‘序列啦...

我也这么觉得,可是做不出来结果...郁闷中
一切都会好的!
6楼2013-03-22 15:22:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山还在那儿

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不晓得你用的是不是末端脱氧核苷酸转移酶(TDT),是的话就应该能给RNA(核糖核苷酸)加A了。。。。
7楼2013-09-02 13:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shangrila911 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见