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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 末端转移酶加的是dATP，之后可以用olige dT 为上游引物进行PCR吗？
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shangrila911

新虫 (小有名气)

[交流] 末端转移酶加的是dATP，之后可以用olige dT 为上游引物进行PCR吗？ 已有2人参与

如上述，我这么做 一直都没有带？求解释
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一切都会好的!
1楼 2013-03-18 10:04:56
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gyesang

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末端转移酶是一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3′-OH基上的酶。如果你加的是dATP，那么末端转移酶会在3‘-OH端加上一系列的A，之后可以用olige dT 进行扩增，但olige dT 是3’端引物也即是下游引物。
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2楼2013-03-18 13:25:27
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shangrila911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-18 13:25:27
末端转移酶是一种能将脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)加到某DNA片段上3′-OH基上的酶。如果你加的是dATP，那么末端转移酶会在3‘-OH端加上一系列的A，之后可以用olige dT 进行扩增，但olige dT 是3’端引物也即是下游引物。

3'的序列是已知的，反转录用的引物是特异性的，Olige dT只能是下游引物吗？

无标题.png
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3楼2013-03-18 15:00:51
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shangrila911

新虫 (小有名气)
哦，上面的adapter primer标错了
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4楼2013-03-18 15:02:31
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gyesang

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引用回帖:
3楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-03-18 15:00:51
3'的序列是已知的，反转录用的引物是特异性的，Olige dT只能是下游引物吗？

无标题.png
...

这种情况就可以扩增mRNA序列的5‘序列啦
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5楼2013-03-18 19:10:14
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shangrila911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-18 19:10:14
这种情况就可以扩增mRNA序列的5‘序列啦...

我也这么觉得，可是做不出来结果...郁闷中
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6楼2013-03-22 15:22:47
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山还在那儿

银虫 (小有名气)
★
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不晓得你用的是不是末端脱氧核苷酸转移酶（TDT），是的话就应该能给RNA(核糖核苷酸)加A了。。。。
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7楼2013-09-02 13:24:32
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