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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌转化
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gcr2007

银虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌转化

各位大侠帮帮忙，我用变铅青链霉菌原生质体转化后，细胞变红后就不在产孢子了，有的只停留在像大肠菌落一样的状态就不产孢了。不能理解啊，请大家帮帮忙。培养基采用的R2YE。

IMG_0343.JPG



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选择就不能放弃，痛苦是因为徘徊不定
1楼 2013-03-08 10:05:30
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

为何不尝试直接利用接合转移从大肠杆菌ET12567/pUZ8002转移质粒到链霉菌。你做的原生质体转化步骤是否完整，转化完成后有细胞壁再生等步骤。链霉菌经常会受外源质粒的影响而不产孢子，有时还会影响气生菌丝的发育。
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要有最遥远的梦想
2楼2013-03-12 11:29:05
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gcr2007

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-12 11:29:05
为何不尝试直接利用接合转移从大肠杆菌ET12567/pUZ8002转移质粒到链霉菌。你做的原生质体转化步骤是否完整，转化完成后有细胞壁再生等步骤。链霉菌经常会受外源质粒的影响而不产孢子，有时还会影响气生菌丝的发育。

非常感谢你。我是按照手册上的原生质体转化步骤做的，我们实验室没有做链霉菌的，一切只能按文献摸索做，步骤应该没问题，请问你们遇到这种情况后换为结合转移就解决了么？
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选择就不能放弃，痛苦是因为徘徊不定
3楼2013-03-14 09:09:10
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gcr2007: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-16 07:38:27
你可以根据链霉菌手册上原生质体转化或者接合转移的方法导入外源DNA，产孢或者菌丝发育状况与转化方式无关，并不是说你换成接合转移，菌体生长情况不良的情况就能改善，菌体情况只是与外源质粒以及插入的片段有关，不同的链霉菌对此的反应不一样，我个人经验。
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要有最遥远的梦想
4楼2013-03-15 10:21:10
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gcr2007

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-15 10:21:10
你可以根据链霉菌手册上原生质体转化或者接合转移的方法导入外源DNA，产孢或者菌丝发育状况与转化方式无关，并不是说你换成接合转移，菌体生长情况不良的情况就能改善，菌体情况只是与外源质粒以及插入的片段有关， ...

非常感谢，请问能留一下联系方式吗？我刚开始做链霉菌，我们实验室没做过，所以平时也找不到人交流一下，谢谢啦
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选择就不能放弃，痛苦是因为徘徊不定
5楼2013-03-16 08:58:15
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lvxingan1989

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我有一个小建议你可以试试，那就是把你的转化菌先用R2YE培养基液体再生，而后再转涂布到高氏一号固体平板（适当加些筛选压力）
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实验一般叫人很纠结..
6楼2013-03-17 15:03:34
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关心512

新虫 (初入文坛)
我也在做原生质体制备这一块，你可以多培养几天，我的菌株一般要十来天才会有产孢的迹象。
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7楼2018-05-30 16:32:12
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