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怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解?
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各位战友,有谁做过脑缺血再灌注试验,离体脑组织中ATP的液相含量测定,怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解,现在我用的样品处理方法是取0.3g脑组织,立即用0.5mol/L高氯酸溶液2ml在冰水浴充分匀浆静置10min,0~4℃以3000rpm离心10min,取上清加入0.5mol/L氢氧化钾调ph为6.5,再以10000rpm离心10min,取上清进样走液相。液相色谱条件为色谱柱Hypersil ODS C18 250mm*4.6mm,柱温40℃,检测波长254nm,流动相A:70mmol/L磷酸二氢钠+3mmol/L四丁基溴化铵(调ph6.5),流动相B:甲醇。A:B=90:10,流速1ml/min。 现在的问题是对照品出峰顺序为AMP 7.3min,ADP 14.4min,ATP 27.2min,分离效果挺好,但是样品中的ADP和ATP检测不出来,基线就是平的,很郁闷,不知是哪里出了问题,是ATP分解了吗,还是别的原因,请帮忙分析一下,非常感谢 |
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