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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » ChIP实验中Input control是如何控制的?
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)

[求助] ChIP实验中Input control是如何控制的? 已有2人参与

ChIP实验中Input control是如何控制的?做PCR检测时，Input control的用量和免疫共沉淀获得的DNA片段的用量之间的关系是怎样的？

[ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:34 ]
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1楼 2013-03-05 08:39:22
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuxiuaza: 金币+2, ★有帮助 2013-03-05 10:14:53
input不需要严格控制，只要在超声后，电泳检测大部分集中在500bp左右就可以；
PCR检测时，用量是一致的，我做的时候，都加1ul做模板，但是最后肯定是input亮于目的片段！而IgG可以作为阴性对照！
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寻找真正的自我！
2楼2013-03-05 08:47:31
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liuxiuaza

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-05 08:47:31
input不需要严格控制，只要在超声后，电泳检测大部分集中在500bp左右就可以；
PCR检测时，用量是一致的，我做的时候，都加1ul做模板，但是最后肯定是input亮于目的片段！而IgG可以作为阴性对照！

那你超声后是不是取了相同体积的裂解产物做免疫共沉淀和Input的？
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3楼2013-03-05 10:14:43
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lhs521521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuxiuaza at 2013-03-05 10:14:43
那你超声后是不是取了相同体积的裂解产物做免疫共沉淀和Input的？...

当然要相同体积了！
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寻找真正的自我！
4楼2013-03-06 08:13:50
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leicandy

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-12-23 11:17:22
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果用的相同的蛋白拉的，应该一样！
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寻找真正的自我！
6楼2013-12-23 11:56:18
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-06 08:13:50
当然要相同体积了！...

一般取1%做input就够了吧？剩下的都可以拿去做免疫沉淀。
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7楼2014-05-05 13:28:14
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dd20091225

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-05-05 13:28:14
一般取1%做input就够了吧？剩下的都可以拿去做免疫沉淀。...

1%的input是指V（input）/V(IP)吗？
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8楼2015-03-12 16:54:03
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dd20091225 at 2015-03-12 16:54:03
1%的input是指V（input）/V(IP)吗？...

对的，1mL样品取10uL就够了
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9楼2015-03-12 17:27:18
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dd20091225

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangpeng227 at 2015-03-12 17:27:18
对的，1mL样品取10uL就够了...

那么后面计算%input的时候，% Input = 2 (-∆Ct [normalized ChIP])，∆Ct [normalized ChIP] = (Ct [ChIP] - (Ct [Input] - Log2 (Input Dilution Factor)))，这个input dilution factor，是指input回收后的DNA的稀释吗？如果没有稀释就是1对吗？那个input的留多少是不是都是可以的比如2%之类的，只要对照组和处理组一样就行吗？还是这个1%的input的是有用于后面的计算的？不好意思问题有点多~因为太多不明白了~O(∩_∩)O~
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10楼2015-03-13 13:29:58
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