24小时热门版块排行榜    

查看: 174  |  回复: 4
当前主题已经存档。
【悬赏金币】回答本帖问题,作者njml将赠送您 5 个金币

njml

金虫 (小有名气)

[求助] 引物间Tm相差16度,如何设置退火温度

做PCR,一条引物Tm为76.55,另一条为60.26,做了梯度PCR,退火温度在50和56.8时均出现目的条带,但非特异扩增产物较多,降低模板量又没东西了.请问象这种Tm相差比较大的引物如何进行PCR?

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

austin2008

铁杆木虫 (著名写手)

Tm相差这么大,换个引物试试,一般相差在4度以内比较好!
另外我怀疑你的Tm值计算有误,你是不是计算了酶切位点的?!
优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
2楼2007-08-23 08:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiasanlin

金虫 (小有名气)

你试一试现在高Tm的引物条件下跑5个循环后,然后在低的Tm条件下跑我这样试过一个差10度的引物对。
3楼2007-08-23 11:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyuyue2006

金虫 (正式写手)

你做一个降落pcr看可以不
4楼2007-08-23 11:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njml

金虫 (小有名气)

昨天用65度循环5次,然后50度循环25次,还是没有目的带,有一200bp以下的非特异产物和引物二聚体.今天再降低温度试试.
5楼2007-08-24 13:44:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 njml 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +11 wangze12014 2026-08-14 13/650 2026-08-21 11:00 by 大快人心啦
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见