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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 定量问题
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花

[求助] 定量问题

各位大侠，请给指导！我做的绝对定量，我想知道绝对定量是不是每次必须做标准曲线？能不能用一条标准曲线？另外，我的样品比较多，一次在一个板子上不能跑完，他们说必须在一个板子上比对才准确，应该该怎么办？不胜感激！
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1楼 2013-03-01 08:36:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-03-02 06:41:37
标准曲线当然是每次做最好，但实际操作上就是独立做两次，看差别是否很大。一般不大的话就不要再做了。不同板之间可能会有一些差别。实在不能一板跑完的话，我的做法是每个板都跑一下同一样品同一基因（比方说内参什么的），然后把这个样品的结果当做internal control，其它CT根据这个样品校订。
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2楼2013-03-01 11:32:53
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
qiuzhileipo: 金币+5 2013-03-01 13:28:23
我觉得最好每次都做标准曲线；
样品多，每一板加个共同的样就行，最后做比对分析，没问题！
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寻找真正的自我！
3楼2013-03-01 12:21:23
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-01 11:32:53
标准曲线当然是每次做最好，但实际操作上就是独立做两次，看差别是否很大。一般不大的话就不要再做了。不同板之间可能会有一些差别。实在不能一板跑完的话，我的做法是每个板都跑一下同一样品同一基因（比方说内参什 ...

每一个板上只跑一个同一基因，那怎么校订呢？而且我的结果用原核细胞的绝对定量个数/真核细胞的绝对定量个数的比值。
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4楼2013-03-01 13:34:49
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
3楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-01 12:21:23
我觉得最好每次都做标准曲线；
样品多，每一板加个共同的样就行，最后做比对分析，没问题！

加一个共同的样啊，定量机器的阈值是自动生成的，如果阈值不同，这样比对准确么？
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5楼2013-03-01 13:36:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qiuzhileipo at 2013-03-01 13:34:49
每一个板上只跑一个同一基因，那怎么校订呢？而且我的结果用原核细胞的绝对定量个数/真核细胞的绝对定量个数的比值。...

我指的是每个板上都跑一个相同的样，理论上这个样品的CT值是一样的，根据这个作为reference，校订板与板之间的差异。
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6楼2013-03-02 04:34:21
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