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盼盼小心语

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[求助] 汉逊酵母野生菌在zeocin抗性平板上也能长到底是什么原因

大家好，我做的是汉逊酵母，一个转化困扰我太久了。本来野生型的汉逊酵母在zeocin100微克每毫升抗性板上是不能长的，可是我的野生菌涂此抗性平板之后总是出现像转化一样的单菌落效果，另外菌饥饿点板确实是不长。我也挑单菌落摇起来涂了板，还是一样的情况，点板不长涂板长。这样的话我没法正常做转化，将我的含zeocin抗性基因的工程质粒重组，现在真不知道该怎么做了，请给位高手为我指点迷津，不胜感激！

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1楼 2013-01-31 08:55:18

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dazey

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LZ你好！我想请教一个问题。

我的汉逊酵母转化后（师姐在其他学校帮忙做的），培养4天没长，然后放在冰箱里了，有个板子在冰箱里放了一个月又长起来了。。很奇怪，很少见板子放冰箱里从没有菌斑长到菌斑很大的情况（大肠杆菌什么的都做过）。然后用无机盐培养基挑菌、摇菌，6天了培养基都是清亮清亮的，一点菌都没长。
请问这是什么情况？难道板子污染了？？

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2楼2013-03-12 21:05:05

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盼盼小心语

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引用回帖:

2楼: Originally posted by dazey at 2013-03-12 21:05:05
LZ你好！我想请教一个问题。

我的汉逊酵母转化后（师姐在其他学校帮忙做的），培养4天没长，然后放在冰箱里了，有个板子在冰箱里放了一个月又长起来了。。很奇怪，很少见板子放冰箱里从没有菌斑长到菌斑很大的情 ...

嗯，你描述的情况看，很可能是污染了，因为汉逊酵母本身生长速度很快，36小时就能长很大菌落，四天没长估计就是没转好。就算是放冰箱里面也容易污染的，很正常。

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3楼2013-03-14 08:19:15

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另外告诉你一点个人经验，转化方法很重要，尤其是DTT的作用很明显，不知道你转线性化的片段还是质粒，浓度一定要弄高一些才好，否则效率很低的

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4楼2013-03-14 15:52:01

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