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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用提取液过夜浸泡E.Coli（Bi 8337/41）来提取荚膜多糖 是否会导致细胞破裂
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zardestine

银虫 (小有名气)

[求助] 用提取液过夜浸泡E.Coli（Bi 8337/41）来提取荚膜多糖 是否会导致细胞破裂

我是在第三次提取的时候过夜的得到非常浓的糖溶液，因为前一次的提取已经很淡了（之前提取时间只有30min），第三次便索性过夜。用的提取液是：50mM Tris 5mM EDTA pH7，恳请前辈分享宝贵经验。
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1楼 2013-01-24 22:25:05
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zardestine: 金币+5, ★有帮助 2013-05-30 21:41:41
多糖提取你应该不用担心菌破裂。再说细菌处理，不管你是30分钟，也是会有菌破裂。个人认为，糖含量为主。
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shine
2楼2013-01-25 09:15:27
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genda_cto

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非常浓是多浓？你多少菌体对多少体积的提取液？提取温度？多糖用的是什么定量方法？提取之后有否纯化，用的是什么方法？能否排除除了多糖外其他物质对定量方法的影响？TE缓冲液浸提后不是只溶多糖，色素类物质对很多多糖的定量方法影响很大。
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3楼2013-01-25 12:34:42
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genda_cto

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

非常浓是多浓？你多少菌体对多少体积的提取液？提取温度？多糖用的是什么定量方法？提取之后有否纯化，用的是什么方法？能否排除除了多糖外其他物质对定量方法的影响？TE缓冲液浸提后不是只溶多糖，色素类物质对很多多糖的定量方法影响很大。
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4楼2013-01-25 12:35:37
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zardestine

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by genda_cto at 2013-01-25 12:34:42
非常浓是多浓？你多少菌体对多少体积的提取液？提取温度？多糖用的是什么定量方法？提取之后有否纯化，用的是什么方法？能否排除除了多糖外其他物质对定量方法的影响？TE缓冲液浸提后不是只溶多糖，色素类物质对很多 ...

感谢您的回答：我用的是硫酸苯酚法检验多糖，并未定量，但从颜色深浅可明显看出过夜后的提取液颜色深了许多，尚诺有其他物质对颜色造成影响，那也不会是变量，您怎么看？
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5楼2013-01-25 15:29:38
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genda_cto

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zardestine at 2013-01-25 15:29:38
感谢您的回答：我用的是硫酸苯酚法检验多糖，并未定量，但从颜色深浅可明显看出过夜后的提取液颜色深了许多，尚诺有其他物质对颜色造成影响，那也不会是变量，您怎么看？...

色素类物质对浓硫酸苯酚法测多糖的干扰非常大。颜色深并不一定意味着抽提的多糖多了。不如进一步纯化后，出结果再下定论。
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6楼2013-01-30 12:36:49
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