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sunchenli

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR之前能扩出来,后来再做却扩不出来,求高手指教!!!

我自己设计的一对引物,同样的反应体系,同样的PCR循环参数,先前做几次都能扩出来,后来再做却扩不出来了,不管换什么样的条件,总是什么条带都没有。我只有13个金币,都拿出来了,跪求各位PCR高手指教啊,谢谢了啊!!
附引物序列:上:GCATCGCCAACTTCTTCC
                     下:CCCGCTGTTCTTCTTGC
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sunchenli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qitianyang at 2013-01-22 10:39:39
引物反复冻融肯定是不好的。建议您下次贮存引物时还是应该配制好100uM的母液以后分装几支,避免反复冻融同一支。如果还有母液就重新稀释吧。没有母液的话倒不如重新订引物了,几十块钱,3天左右。应该比纠结于此合 ...

聚合酶我已经重订了一个公司的,今天在试,谢谢了
7楼2013-01-22 16:43:24
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sunchenli

新虫 (初入文坛)

补充一下,我的引物放了已经有差不多半年了,是宝生物合成的,我再想问下,这么长时间引物会不会出问题了????
2楼2013-01-21 16:13:28
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mzchongchong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的引物如果正确的存放在-20度,半年的时间应该不会有问题的.
我之前跟你遇到的问题一样,换了另一种聚合酶,然后就得到了目的条带,建议你换一种聚合酶试试.
You'renevertoooldtolearnsomethingstupid.
3楼2013-01-21 18:19:33
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sunchenli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mzchongchong at 2013-01-21 18:19:33
你的引物如果正确的存放在-20度,半年的时间应该不会有问题的.
我之前跟你遇到的问题一样,换了另一种聚合酶,然后就得到了目的条带,建议你换一种聚合酶试试.

再请问下,引物一般最多能反复冻融几次?我的引物已经被我冻融过4-5次了,会降解吗?
4楼2013-01-22 09:47:23
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