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dongyanqutao

铜虫 (初入文坛)

[交流] rna浓度 已有5人参与

我是新接触这个方面的东西，还请大家给点意见，我从提取的RNA中吸取了2微升加100微升的水稀释，最后的260与280的比值为2左右，请问这样的浓度可以做反转录吗
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1楼 2013-01-17 15:49:26
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yesali

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-17 20:57:45
浓度要看OD 260的值，稀释后测OD260，得到的OD值乘以稀释倍数，乘以40 μg/μl，得到的就是你的RNA的浓度。
260与280的比值只能说明你提的RNA还行，最好跑胶看一下RNA的条带。
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2楼2013-01-17 15:53:29
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dongyanqutao

铜虫 (初入文坛)
哦谢谢，可是多大的浓度范围比较呢，我已经跑过胶了，条带还是可以的
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3楼2013-01-17 16:00:59
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你要做反转录的话，20ul体系里加1ug的RNA就行。
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哦也
4楼2013-01-17 16:58:17
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weebug

版主 (著名写手)
也测下230
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2013-01-17 18:28:22
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wxf-er

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-17 20:57:54
260/280 和260/230 检测的是纯度，跑变性胶检测的是完整性；浓度测OD260，每 1 OD值代表40μg / ml （注意单位），最后计算还得乘以稀释倍数；按你测得260，浓度应该在4μg /μl，反转录20ul体系需要的不超过1μg，稀释下用。
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自然
6楼2013-01-17 20:40:07
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dongyanqutao

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wxf-er at 2013-01-17 20:40:07
260/280 和260/230 检测的是纯度，跑变性胶检测的是完整性；浓度测OD260，每 1 OD值代表40μg / ml （注意单位），最后计算还得乘以稀释倍数；按你测得260，浓度应该在4μg /μl，反转录20ul体系需要的不超过1μg， ...

谢谢，那再请问如果我没有稀释就做了反转录，结果会是怎么样的
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7楼2013-01-18 12:21:17
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么反转不能超过1ug，超过会怎么样啊
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8楼2013-01-18 12:29:08
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wxf-er

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by dongyanqutao at 2013-01-18 12:21:17
谢谢，那再请问如果我没有稀释就做了反转录，结果会是怎么样的...

用量超了也没关系，多些少些，只是反应效率或者效果的问题。结果仍就会有，别担心
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自然
9楼2013-01-18 13:47:30
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dongyanqutao

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wxf-er at 2013-01-18 13:47:30
用量超了也没关系，多些少些，只是反应效率或者效果的问题。结果仍就会有，别担心...

我想问下你的PCR体系和温度条件是怎样的
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-19 11:33:52
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