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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 紧急求助。。。。摇菌摇不起来，要多郁闷有多郁闷啦
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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 也许是 2013-01-17 17:14:18
我之前也遇到过这个问题，后来发现时抗生素浓度过高导致的，你试试不加抗生素看菌能摇起来不
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一句承诺，一生执着
11楼2013-01-17 12:56:39
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ripplings

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-01-17 10:51:15
用的是氨苄抗性吗？
前段时间这边实验室也是，挑单克隆摇不起来，后来发现是amp除了问题。

氨苄、卡那都有这个问题
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慢，是一种失传已久的艺术。
12楼2013-01-17 13:44:04
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 我感觉也是 2013-01-17 17:15:35
菌种已经被污染了，应该是。
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蓝精灵
13楼2013-01-17 14:28:21
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iamufo

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
1949stone: 金币+2, 做的比较彻底会好一点 2013-01-17 17:14:49
引用回帖:
8楼: Originally posted by ripplings at 2013-01-17 12:09:51
我们也熏蒸过两次，完全没效果啊。...

如果是噬菌体感染的话那就有些麻烦了，对付噬菌体没什么好办法，也不太好控制，我当时用消毒液把实验室所有的台面擦了一遍，再熏一晚上才勉强有些效果。
实验室要注意卫士，废弃的培养基什么的要及时清理，而且最好要毒处理后再丢弃。
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下载cns全文网站：http://blog.sciencenet.cn/?fromuid=516180
14楼2013-01-17 14:47:42
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neverold

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 突然感觉压力很大 2013-01-17 17:15:12
摇起来变清了，百分之百是噬菌体污染了，跟抗生素没关系
近一个月的所有菌种全部丢弃，所有摇床，培养箱擦拭干净后，密封实验室甲醛熏蒸3天以上
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15楼2013-01-17 16:46:41
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 我感觉也是 2013-01-17 17:15:24
我也觉得是你的菌种出现问题了！
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16楼2013-01-17 16:52:36
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检查是不是摇床温度会升高，天冷后控温如果不灵，温度超过设定温度太多，会导致菌死亡！过一小时看看你的菌
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shine
17楼2013-01-17 19:27:10
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
这个以前也遇到过，真的很头疼，最后因为放个长假，实验室大扫除，消毒，甲醛熏蒸，密封关闭，最后终于度过去了。
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Thank-you，so-blue.
18楼2013-01-17 20:25:49
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

很多环节都有可能出现问题。
1）建议质粒跑胶后切胶回收，重新购买感受态细胞，重新转化。这样能排除质粒和感受态细胞的问题。
2）抗生素、IPTG等重新配置，确保浓度没出错。
3）还有一种可能是大瓶没刷干净。一定要刷干净，这个理由看起来很逗，但是我们已经验证过了。
4）大瓶在无菌接种的时候容易污染，有可能是超净工作台不好了，检查超净工作台上面的滤菌的那层。
5）国内很多实验室摇菌的时候用一层无菌滤膜，有时候外面再包两层锡纸会好一点。或者直接用八层纱布，菌长得又快又好。
6）如果是加完IPTG就自溶，可以考虑等OD高一点再诱导。用我们老板的话说，大肠杆菌在OD0.6的时候几乎是它最脆弱的时候，可以等它成熟一点再诱导，比较皮实，经得起折腾。
归根结底，如果整个实验室都摇不起来，可能是公共试剂或者环境的问题。如果只是个别人摇不起来，那么，检查你的质粒，以及你的操作方法。个人感觉跟操作手法有很大关系。
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19楼2013-02-01 14:32:01
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borntowin27

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据你的描述，99%是噬菌体污染，典型表现就是开始摇出来了，有点变浑浊，最后有变清了，摇晃试管注意看的话，你会发现好多碎片，这就是被噬菌体侵染后的细菌碎片了...
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20楼2013-02-05 13:36:41
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