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melaniqiuqiu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 也许是 2013-01-17 17:14:18
我之前也遇到过这个问题,后来发现时抗生素浓度过高导致的,你试试不加抗生素看菌能摇起来不
一句承诺,一生执着
11楼2013-01-17 12:56:39
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ripplings

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-01-17 10:51:15
用的是氨苄抗性吗?
前段时间这边实验室也是,挑单克隆摇不起来,后来发现是amp除了问题。

氨苄、卡那都有这个问题
慢,是一种失传已久的艺术。
12楼2013-01-17 13:44:04
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 我感觉也是 2013-01-17 17:15:35
菌种已经被污染了,应该是。
蓝精灵
13楼2013-01-17 14:28:21
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iamufo

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
1949stone: 金币+2, 做的比较彻底会好一点 2013-01-17 17:14:49
引用回帖:
8楼: Originally posted by ripplings at 2013-01-17 12:09:51
我们也熏蒸过两次,完全没效果啊。...

如果是噬菌体感染的话那就有些麻烦了,对付噬菌体没什么好办法,也不太好控制,我当时用消毒液把实验室所有的台面擦了一遍,再熏一晚上才勉强有些效果。
实验室要注意卫士,废弃的培养基什么的要及时清理,而且最好要毒处理后再丢弃。
下载cns全文网站:http://blog.sciencenet.cn/?fromuid=516180
14楼2013-01-17 14:47:42
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neverold

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 突然感觉压力很大 2013-01-17 17:15:12
摇起来变清了,百分之百是噬菌体污染了,跟抗生素没关系
近一个月的所有菌种全部丢弃,所有摇床,培养箱擦拭干净后,密封实验室甲醛熏蒸3天以上
15楼2013-01-17 16:46:41
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 我感觉也是 2013-01-17 17:15:24
我也觉得是你的菌种出现问题了!
16楼2013-01-17 16:52:36
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
检查是不是摇床温度会升高,天冷后控温如果不灵,温度超过设定温度太多,会导致菌死亡!过一小时看看你的菌
shine
17楼2013-01-17 19:27:10
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

这个以前也遇到过,真的很头疼,最后因为放个长假,实验室大扫除,消毒,甲醛熏蒸,密封关闭,最后终于度过去了。
Thank-you,so-blue.
18楼2013-01-17 20:25:49
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

很多环节都有可能出现问题。
1)建议质粒跑胶后切胶回收,重新购买感受态细胞,重新转化。这样能排除质粒和感受态细胞的问题。
2)抗生素、IPTG等重新配置,确保浓度没出错。
3)还有一种可能是大瓶没刷干净。一定要刷干净,这个理由看起来很逗,但是我们已经验证过了。
4)大瓶在无菌接种的时候容易污染,有可能是超净工作台不好了,检查超净工作台上面的滤菌的那层。
5)国内很多实验室摇菌的时候用一层无菌滤膜,有时候外面再包两层锡纸会好一点。或者直接用八层纱布,菌长得又快又好。
6)如果是加完IPTG就自溶,可以考虑等OD高一点再诱导。用我们老板的话说,大肠杆菌在OD0.6的时候几乎是它最脆弱的时候,可以等它成熟一点再诱导,比较皮实,经得起折腾。
归根结底,如果整个实验室都摇不起来,可能是公共试剂或者环境的问题。如果只是个别人摇不起来,那么,检查你的质粒,以及你的操作方法。个人感觉跟操作手法有很大关系。
19楼2013-02-01 14:32:01
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borntowin27

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

根据你的描述,99%是噬菌体污染,典型表现就是开始摇出来了,有点变浑浊,最后有变清了,摇晃试管注意看的话,你会发现好多碎片,这就是被噬菌体侵染后的细菌碎片了...
20楼2013-02-05 13:36:41
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