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ripplings

金虫 (小有名气)

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[求助] 紧急求助。。。。摇菌摇不起来，要多郁闷有多郁闷啦

最近摇菌一直不正常，一开始有时候一个摇床才几瓶出问题，有的是直接摇不起来，有的是摇起来之后后来变清了。中间有几次又都正常。

现在越来越严重，经常都是整床摇不起来。

LB培养基应该没问题，试剂药品都没变，测pH也正常。而且小瓶活化基本都没事，能活化起来。一接到大瓶就出问题。

500mL大瓶用泡酸、新瓶子都还是一样的情况。灭菌锅压力温度正常，摇床2台都刚做过校验的，温度也正常。甚至超净台都换了一个新的，在另一个房间，一开始似乎好点，但马上也有问题了。。。

甲醛熏蒸过两次，最近一次刚熏蒸完接菌大概50m3的房子，用了600mL甲醛+600gKMnO4。一次小瓶能活化起来，大瓶30瓶只摇起6瓶；另一次小瓶能活化起来，30瓶完全摇不起来。

操作应该也没有问题，以前都好好的。。。。

实在木有办法了。

这到底是什么状况嘛。。。。。。太欺负人了。。。

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慢，是一种失传已久的艺术。

1楼2013-01-17 06:53:24

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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

很多环节都有可能出现问题。
1）建议质粒跑胶后切胶回收，重新购买感受态细胞，重新转化。这样能排除质粒和感受态细胞的问题。
2）抗生素、IPTG等重新配置，确保浓度没出错。
3）还有一种可能是大瓶没刷干净。一定要刷干净，这个理由看起来很逗，但是我们已经验证过了。
4）大瓶在无菌接种的时候容易污染，有可能是超净工作台不好了，检查超净工作台上面的滤菌的那层。
5）国内很多实验室摇菌的时候用一层无菌滤膜，有时候外面再包两层锡纸会好一点。或者直接用八层纱布，菌长得又快又好。
6）如果是加完IPTG就自溶，可以考虑等OD高一点再诱导。用我们老板的话说，大肠杆菌在OD0.6的时候几乎是它最脆弱的时候，可以等它成熟一点再诱导，比较皮实，经得起折腾。