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宇翔恋歌

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR内参

现在我正在跟师姐学习PCR,做了一两次 师姐说内参没出来 你先别跑了 逆转录酶挺贵的 郁闷 所以求教虫友下 谁来解释下内参呗
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风萧萧兮易水寒
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medicallls

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
宇翔恋歌: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢哈 2013-01-15 15:34:24
内参其实就是管家基因,是指在所有细胞中均要表达的一类基因,在PCR相对定量中的作用相当于物理学上的参照物,目的基因表达的变化以参照物为标准计算其相对变化,因此在相对定量PCR实验中,内参基因的扩增必须是稳定的特异的,可见你师姐是高手。
继续努力!
2楼2013-01-15 13:41:29
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liugn

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
宇翔恋歌: 金币+5, ★★★很有帮助, 好的 以后多交流 2013-01-17 09:27:17
同意楼上。内参就是指管家基因,我一般都是使用GAPDH 作为我的PCR内参,但是内参的引物跟你的PCR 引物不同,别加错了,另外,除了设置内参,我还做control 组,以保证sample 的condition 正确,所以我的上样顺序为:不加DNA组(negative control), 已知DNA(即上次PCR做成功的sample), 然后内参,然后各个sample。同时,为了防止我的操作手法不一致造成的误差,我一般每个样本做两个孔(多一个副孔)。祝你实验顺利,如果觉得有用的话请给我发金币啊,我是新注册者,急需金币。另外,我在美帝读PHD,可以帮你下免费的文献,哈哈!!
3楼2013-01-16 10:03:18
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