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贝利尔

铁虫 (小有名气)

[求助] COX酶活性测试

为了测试化合物对COX酶的活性,因此买了Cayman公司的560131的试剂盒。今天做了标准曲线,曲线的R方在0.986左右,应该说还不错。
但是说明书上要求的B0在0.3-0.8间,我测得的最小值为0.86(已经减去空白)。我也已经根据说明书,在分别在405,410,415,420nm这几个波段检测过,但是测得的B0的最小值为0.86。请教下曾经做过COX活性筛选的各位,B0>0.8会有什么结果,是我什么操作失误的地方么?
B0的定义:(maximun binding)maximum amount of the tracer that the antibody can bind in the absence of free analyte.
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
贝利尔: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢! 2013-01-06 17:00:27
你的值相差不大的话没大的关系。
主要的问题在于如果BO太大,表明你的chrome基团会影响光的通透性。这也是与光学测定有关的溶液均要求稀溶液的原因。至于你的值偏高的问题,得有你的样品数据。
shine
2楼2013-01-06 14:45:33
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贝利尔

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-06 14:45:33
你的值相差不大的话没大的关系。
主要的问题在于如果BO太大,表明你的chrome基团会影响光的通透性。这也是与光学测定有关的溶液均要求稀溶液的原因。至于你的值偏高的问题,得有你的样品数据。

因为是第一次做这个酶的活性筛选,所以第一次做的时候就做了2条标曲。
昨天用Cayman提供的软件算了下,结果提示我405nm下的Blk孔的值太大,只有420nm下的blk能通过,但是说明书上完全没有提到Blk的问题,最多只提了NSB值不能太大。
现在越来越糊涂了><
3楼2013-01-06 17:08:02
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lizefan

木虫 (正式写手)

楼主,你测定cox活性的时候大概理解多少细胞啊?我用了80裂解液裂解3*10的6次方的HeLa,没有检测到洗吧活性。。。谢谢!
noimpossible!
4楼2015-05-15 20:05:25
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