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cqq0217银虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】关于Rat cyclic adenosine monophosphate(cAMP) Elisa Kit 的几个问题
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关于Rat cyclic adenosine monophosphate(cAMP) Elisa Kit 的几个问题： （1）关于裂解那里我还是没理解下面这段话一些部分。个人觉得裂解方法是2种： 第一种，直接弃去细胞培养液，加入0.1 M HCl ，孵育10min 或20min，至裂解，（但是加入体积是多少呢？难道加1ml 的0.1 M HCl 那么多吗？还是我的理解有误，应该先弃含药物预处理的培养液，再加入1ml 不含血清的DMEM培养基，其中再加10 ul concentrated hydrochloric acid，这是饱和盐酸的意思，与0.1 M HCl 是不一样的吧？），然后离心（600 x g，室温，多久？），取上清用于接下来elisa。 第二种：先弃含药物的培养液，然后再加入1ml 的不含血清的DMEM培养基，其中再加 0.1% to 1% Triton x-100（体积呢？） 和 0.1M HCl （10 ul）concentrated hydrochloric acid，然后再离心（600 x g，室温，多久？），取上清用于接下来的elisa。 关于加了tritonx-100的这种裂解方法，在做elisa会增加光密度值，是不是说在用标准物稀释成250 pmol/ml, 50 pmol/ml, 10 pmol/ml, 2 pmol/ml, 0.4 pmol/ml, 0.08 pmol/ml时，都是用triton和HCl? 这样的话，又是怎么配置？相应的NSB和B0孔在第二步加HCL 改为加Triton 和HCL 的混合液。 Cells grown in tissue culture media can be treated with 0.1M HCl after first removing the media. Incubate for 10 minutes and visually inspect the cells to verify cell lysis. If adequate lysis has not occurred incubate for a further 10 minutes and inspect. Centrifuge at 600 x g at room temperature, then use the supernatant directly in the assay. Cell or tissue lysis can be enhanced by adding 0.1% to 1% Triton x-100 to the 0.1M HCl prior to use. When used in this concentration range, the detergent will not interfere with the binding portion of the assay, however there will be a modest increase in the optical density. Samples containing Triton should be evaluated against a standard curve diluted in the same for the most accurate determination. Cyclic AMP in the media can be measured after treating 1 mL of the supernatant media with 10μL of concentrated hydrochloric acid. Centrifuge at 600 x g at room temperature. The supernatants can then be used directly in the assay. 你能不能把你们的做细胞的从裂解到elisa分析的方案发一份给我。主要是关于裂解加了Triton 之后的。 第二个：关于这个elisa，是基于竞争结合法,我不是很确定，包被的羊-抗鼠的IgG，cAMP, HRP-conjugate,抗体（应该是抗cAMP吗？）之间是如何结合，比如说是IgG 是竞争结合cAMP 的抗体吗？为什么它可以结合这种抗体呢?是基于羊与鼠源吗？cAMP与抗体形成复合物后，HRP-conjugate再与这个复合物结合，这个复合物如何固定在孔板上的呢？洗板主要是洗去多余的游离的HRP-conjugate？ |
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2楼2013-01-05 13:33:56
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这个确实就是0.1M，是个浓度单位，问题已经解决了，还是谢谢你 3楼2013-01-07 09:35:04
