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南京建成SOD试剂盒说明书
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| 本人做有关抗氧化方面的实验，需要一份说明书，实验流程，急需，谢谢！ |
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plantsoil(金币+1):thx!
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SOD检测试剂盒！(A001) 发布日期:2006-03-20 一：产品简介： 1 、测定意义：超氧化物歧化酶（ SOD ）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（ O 2 － · ）保护细胞免受损伤。 2、测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（ O 2 － · ） , 后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含 SOD 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的 SOD 活力。高等动物细胞内只有二种 SOD 即铜锌 - SOD （ Cu Zn -SOD ）与锰 - SOD(Mn-SOD), 二者相加等于总 SOD(T-SOD) 。采用我所研制的抽提法处理后的样本， Mn-SOD 活力丧失，而 CuZn-SOD 活力不变，再用 T-SOD 活力减去 CuZn-SOD 活力，即为 Mn-SOD 活力。 3、 简便快速：整个操作过程约 50 分钟，在这期间可测 100 例以上样本。这种短时间测定大批量样本的测试方法，很受广大科研人员的欢迎。 4、 取样量极微：本法取手指或耳垂等末梢血 20 μl ～ 50 μl 即可测红细胞中的 SOD ，只需 2ml 静脉血可测白细胞中的 SOD 及血小板中 SOD ，只需 6mg 组织就可测组织匀浆、胞浆、 0.2g 组织可测线粒体及微粒体中的 SOD 。 5、灵敏度高： ID50=0.05g/ml 是邻苯三酚法灵敏度的 18 倍，因而可测定实验用动物的心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的 SOD ，此法最灵敏。 6、稳定性好：试剂放在 0°C ～ 4°C 冰箱中可保存 6 个月。 7、再现性好：变异系数 CV=1.7% ，同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。 8、回收试验： X + SD=103.3 + 2.63% 9、测试面广：即可测 T-SOD 又可测 Mn-SOD 也可测 CuZn-SOD ，本法测试过实验动物的红细胞、白细胞、血小板、血清（浆）、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等，效果均很佳。 10、方法更先进、技术更成熟：我所在已研制出 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 和 KCN 抑制 CuZn － SOD 法测定 Mn － SOD 的基础上，开发出抽提法测定 CuZn － SOD ，该法不仅无毒无味，而且较 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 更简便 、 更快捷。通过抽提法测定 CuZn － SOD ，同时测定 T － SOD ，即可计算出 Mn － SOD 活力。 11、质优价廉：本试剂盒主要原料为美国进口，但价格与国内邻苯三酚测定法相近。 12、实验仪器简单：所用的 37 ℃恒温水浴锅 、 550nm 处的分光光度计、低速台式离心机、微量移液器等主要实验设备均为实验室常用设备，无需特殊设备。用简单的实验设备测定出高水平的指标。 13 、适用范围广：本试剂盒不仅可以在普通分光光度计上操作，还可以在半自动、全自动生化分析仪、酶标仪上等先进仪器上操作。 14 、说明书简洁、详细，易读易懂，试剂配制简单，实验操作简便易行，操作人员无需专门培训，只需按照说明书要求操作，即可获得理想的实验结果。 15 、此方法经江苏省卫生厅组织的同行专家鉴定，并获卫生厅科技成果一等奖。此专利已由中国、美国、英国等国家专利刊收集。文章发表于南京铁道医学院学报 1991 年 3 月第十卷第一期 27 — 30 页，作者：季建平。 二 、 试剂盒组成： 试剂名称 包装 100T 50T 试剂一： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5 试剂二： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5 试剂三： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5 试剂四： 液体 350 m l × 2 液体 350 m l × 1 试剂四： 稀释液 5ml × 2 稀释液 5ml × 1 试剂五： 粉剂×1 粉剂×1 试剂六： 粉剂×1 粉剂×1 三 、 反应参数： 反应温度 37 ℃ 反应时间 40 分钟 测定波长 550nm 比色光径 1cm 光径玻璃比色皿 四 、 保存条件： 在 4 ℃的保存条件下，可以稳定 6 个月（注意：试剂四不可以冷冻） 我好象回复过你这个帖子了吧? |
2楼2007-07-22 01:23:09
3楼2007-07-22 10:02:28
| [交流求助] |
4楼2007-08-01 18:22:12
dajiahaoma
木虫 (正式写手)
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fys614(金币+1,VIP+0):多谢提供的信息，谢谢！！！！
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你可以参照一下 http://www.beyotime.com/s0060.htm 使用说明： 1. 超氧化物检测工作液的配制： 按照下表比例配制超氧化物检测工作液： 1个检测 5个检测 10个检测 20个检测 50个检测 超氧化物检测缓冲液 200微升 1毫升 2毫升 4毫升 10毫升 WST-1溶液 10微升 50微升 100微升 200微升 500微升 Catalase溶液 2微升 10微升 20微升 40微升 100微升 超氧化物检测工作液 212微升 1.06毫升 2.12毫升 4.24毫升 10.6毫升 2. 悬浮细胞产生超氧化物的检测： a. 细胞用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。 b. 约按5-10万个细胞/毫升的比例，用超氧化物检测工作液悬浮细胞。 c. 在96孔板中，每孔加入200微升用超氧化物检测工作液悬浮的细胞，每孔约1-2万个细胞。 d. 37℃孵育3分钟。 e. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物，如PMA等，刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不 加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系，加SOD溶液的检测可以不做。试 剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表： 细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液 空白对照 ＋ ＋ － － 待测样品 ＋ ＋ ＋ － 阴性对照 ＋ ＋ ＋ ＋ f. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波 长测定。 3. 贴壁细胞产生超氧化物的检测： a. 约按每孔5000-10000个细胞(具体的细胞接种数量须根据细胞的大小和生长速度自行确定)把细胞培养到96孔板中，使第二天 或待检测时细胞为80-90%满。 b. 吸去培养液，用PBS、Hanks液或生理盐水洗涤一次。 c. 每孔加入200微升超氧化物检测工作液，37℃孵育3分钟。 d. 在预定的检测孔中加入预计可以诱导产生超氧化物的刺激物，如PMA等，刺激10-60分钟或其它预定的时间。须至少留一个不 加刺激物的孔作为空白对照。选择1-2个加刺激物的孔中加入2微升SOD以验证整个检测体系，加SOD溶液的检测可以不做。试 剂盒提供的SOD溶液足够做10个检测。具体检测时的安排参考下表： 细胞 超氧化物检测工作液 刺激物 SOD溶液 空白对照 ＋ ＋ － － 待测样品 ＋ ＋ ＋ － 阴性对照 ＋ ＋ ＋ ＋ e. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波 长测定。 |
5楼2007-08-02 08:46:22
