24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2815  |  回复: 15

fw8505

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 痴梦潇湘 at 2012-12-17 11:52:07
第一个主要是抗高血压的,但抗高血压药都比较便宜,如果要研发,估计效果比现有利尿药好很多才行,第二个主要市场应该在不发达的地区吧,我国和欧美市场很小,目前确实有不少研究机构在做抗疟药,也发现了几个新靶 ...

高血压药物太多了,机理也太多了,想要脱颖而出难度还是有的。
对于疟疾药,除去我国和欧美,虽然地理面积也很大,但是似乎卖不到多少钱吧。不过如果找到更有效的药,做个应急储备或者人道援助还是有意义的
11楼2012-12-18 08:45:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huagong071

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
值得学习,谢谢楼主分享!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2012-12-18 08:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pkuchemistry

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by xiananxue at 2012-12-17 19:32:44
那个较新靶点呢...

保密
书中自有黄金屋,书中自有颜如玉。
13楼2012-12-18 23:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痴梦潇湘

木虫 (著名写手)


痴梦潇湘: 回帖置顶 2013-01-04 19:49:39
ApoE4这个靶点的第一个小分子调节剂前几年就已经申请专利了,只是直到最近才公开发表。这个课题组做ApoE研究已有20年历史,连续在JBC、PNAS上刊登相关论文,Merck好像对这个课题组很有兴趣。JMC上没有原始研究,只有一篇综述,不过这个靶点火起来的可能性非常大,毕竟β-分泌酶、γ-分泌酶临床研究连续受挫的情况下,作用明确的新靶点非常值得一试。通过图4可以看到,ApoE4对神经元的生长有非常明显的作用。

ApoE的结构特征
ApoE是一种胆固醇诱导的载脂蛋白(Apoprotein),作为脂转运蛋白存在于血液和组织液中,能够重分配胆固醇和磷脂供细胞代谢或修复生物膜。ApoE是由299个氨基酸构成的蛋白(34kDa),有三种亚型(ApoE2、ApoE3、ApoE4)。三种亚型互相组合形成六种表型(三个杂合子、三个纯合子):ApoE2/2、ApoE3/3、ApoE4/4、ApoE2/3、ApoE2/4、ApoE3/4。三种亚型的不同之处在于112位和158位残基,ApoE2为Cys112/Cys158,ApoE3为Cys112/Arg158,ApoE4为Arg112/Arg158。
ApoE主要由肝细胞合成,进入血液形成脂蛋白颗粒(极低密度脂蛋白、乳糜微粒、高密度脂蛋白),在血浆中的浓度为40-70 μg/mL。第二个合成部位是大脑,主要由星形胶质细胞(astrocyte)合成,受损的神经元也会合成少量ApoE。神经元损伤诱导ApoE的合成,以便转运胆固醇和其他脂质,用于膜修复。另外全身的巨噬细胞(macrophage)、大脑中的小胶质细胞(microglia),也能合成ApoE。脑脊液(cerebrospinal fluid)中,ApoE是主要的脂转运蛋白,与HDL样颗粒和小磷脂颗粒(small phospholipid disk)有关。
ApoE是LDL受体相关蛋白的主要配体,含有两个结构域,N端与LDL受体结合,C端与脂质结合,中间由铰链连接。LDL受体结合区是N端的134-150位氨基酸残基,这一区域富含精氨酸和赖氨酸(碱性)。ApoE3、ApoE4都能与受体结合,而ApoE2与受体结合不好,与III型高脂蛋白血症有关。脂质结合区是C端的244-272位氨基酸残基(推测形成α-螺旋),ApoE2、ApoE2倾向于小的富含磷脂的HDL,ApoE4倾向于大的甘油三酯。
X-ray晶体结构揭示了ApoE3与ApoE4关键氨基酸残基的不同取向(J. Biol. Chem. 1994 , 269, 22358-22365),ApoE4的Arg61能够与Glu255相互作用,而ApoE3不能。ApoE4的Arg61或Glu255变异,可以将其转变为ApoE3样构象,消除ApoE4的有害作用。ApoE2、ApoE3没有这种结构域之间的相互作用(domain interaction),呈现一种比较开阔的结构。另外,在生理状态下,三种亚型的稳定性也有差异(ApoE2>ApoE3>ApoE4)。ApoE4的结构域相互作用和不稳定性,与多种神经系统疾病有关,阻断结构域相互作用,可以消除其有害作用。

ApoE4与Alzheimer’s disease的关系
ApoE4通过两方面影响Alzheimer’s disease:(1)增加患病风险;(2)提前患病年龄,含单个ApoE4等位基因,患病提前7-8年,含一对ApoE4等位基因,患病提前15-16年。65%-80%的AD病人至少含有一个ApoE4等位基因,相反普通人群只有25%是ApoE4携带者。有文献报道,ApoE4的表达会阻碍淀粉样蛋白(Aβ)的清除(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2011, 108, 4236-4241),增加Aβ的合成(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2005, 102, 18700-18705)。
正常情况下,细胞合成ApoE后经内质网-高尔基体转运,分泌到细胞外。由于ApoE4的结构域相互作用,形成异常构象,可能被蛋白酶误解切割,产生有神经毒性的碎片,脱离转运通路,进入细胞质中。这些碎片的有害作用包括:(1)损害神经元线粒体功能:改变线粒体膜电位,降低线粒体电子传递酶活性(如线粒体细胞色素C氧化酶(mtCOX1)和ATP合成酶活性35-40%);(2)降低神经元线粒体运动能力(neuronal mitochondrial motility);(3)阻碍突触生成(synaptogenesis),降低突触连接(synaptic spine)的密度;(4)损害细胞骨架:摧毁微管、Tau蛋白磷酸化、神经纤维缠结;(5)中枢神经系统疾病:海马GABA能中间神经元缺失;损害学习和记忆功能。


ApoE4结构校正剂(ApoE4 structure correctors, ApoE4SC)
Yadong Huang等人筛选了ChemBridge library,发现先导化合物CB9032258,与ApoE4结合后,能阻断ApoE4的结构域相互作用,增加mtCOX1水平。随后与Merck Research Laboratories合作,发现一系列ApoE4SC(PH-001、PH-002活性较好)。
图1. ApoE4结构校正剂



图2. 荧光共振能量转移分析(FRET assay):绿色荧光蛋白(GFP)作为荧光供体,融合在ApoE的N端,大肠杆菌二氢叶酸还原酶(eDHFR)融合在AopE的C端,形成GFP-ApoE-DHFR,将它表达在Neuro-2a细胞上。加入eDHFR高亲和力的配体甲氧苄胺嘧啶(TMP),并且与六氯-6-甲基荧光素(HEX)共轭,对位荧光受体。当GFP与TMP-HEX的距离在7-10 nm时,GFP会激发TMP-HEX发出565nm荧光。GFP-ApoE4-eDHFR的荧光强度要高,因为有结构域相互作用,使得N端和C端互相靠近。当给予化合物CB9032258时,GFP-ApoE4-eDHFR的荧光强度显著下降,而GFP-ApoE3-eDHFR基本不变。


图3. mtCOX1水平分析:表达ApoE3与ApoE4-R61T(61位氨基酸残基变异,不能产生结构域相互作用)的Neuro-2a细胞中mtCOX1水平与对照细胞相似,而表达ApoE4的Neuro-2a细胞中mtCOX1水平显著下降。当给予化合物CB9032258后,表达ApoE4的细胞中mtCOX1水平显著增加,而表达ApoE3和ApoE4-R61T的细胞维持不变。


图4. ApoE4对神经元生长的影响:表达ApoE4的Neuro-2a细胞基本没有长突触,而表达ApoE3和ApoE4-R61T的细胞都能长出长突触。当给予化合物PH-002后,表达ApoE4的细胞也能长出长突触。


[ Last edited by 痴梦潇湘 on 2013-1-4 at 19:51 ]
14楼2013-01-04 19:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sangdy8

至尊木虫 (著名写手)

不再低调

回头拜读
我为人人,人人为我
15楼2013-08-12 16:50:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

coldok

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
LZ涉猎的领域如此广泛,而且每个领域都不是蜻蜓点水,都有自己的独到解读,实在是衷心佩服!
各美其美美人之美美美与共天下大同
16楼2013-08-20 13:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 痴梦潇湘 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见