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[交流]
蛋白质磷酸化试验中的问题交流 已有1人参与
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使用western的方法，检测目的蛋白刺激细胞后细胞内的Akt蛋白是否磷酸化。--------背景交代完毕，惯例割一个----------- 问题交流： 1 蛋白刺激细胞检测信号通路的蛋白磷酸化的实验，常见的刺激时间是多久? 2 怎么确定跑胶时每空上样的蛋白总量是一样的，防止出现western出现的条带的深浅是由于上样量不匀？难道还要总蛋白定个量？小弟上次做的比较粗放，96孔板中接相同体积的细胞，裂解细胞后上同样体积的蛋白跑SDS-PAGE。 3 western 一抗抚育3天是否太过了。磷酸化的抗体结合比较困难。 |
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