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新虫 (正式写手)

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专业: 蛋白质组学

[交流] 蛋白质磷酸化试验中的问题交流已有1人参与

使用western的方法，检测目的蛋白刺激细胞后细胞内的Akt蛋白是否磷酸化。--------背景交代完毕，惯例割一个-----------
问题交流：
1 蛋白刺激细胞检测信号通路的蛋白磷酸化的实验，常见的刺激时间是多久?

2 怎么确定跑胶时每空上样的蛋白总量是一样的，防止出现western出现的条带的深浅是由于上样量不匀？难道还要总蛋白定个量？小弟上次做的比较粗放，96孔板中接相同体积的细胞，裂解细胞后上同样体积的蛋白跑SDS-PAGE。

3 western 一抗抚育3天是否太过了。磷酸化的抗体结合比较困难。

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