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Bella0224

金虫 (小有名气)

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[求助] 利用农杆菌A4的Ri质粒构建富集重金属基因的载体

各位虫友们，我现在正在利用Ri质粒构建富集重金属IRT1和LCT1的基因载体，看目前文献上用的比较多的是Ti质粒，Ri质粒的比较少，不知道各位有木有相关的文献？或者哪位虫友有做这方面的东西，请教一下~~~

1.现在找不到Ri质粒的酶切位点，查询的质粒图谱都不太清楚（如图），只能看到一个Kpn1的酶切位点，有了解这方面内容的虫友吗~~~

2.这两个基因是导师之前定下的，我在NCBI上查到一些存在植物里的基因片段，每个植物都不一样，我要怎么去选择这些基因片段呢？（选择好之后是否直接找公司合成就好了？）

3.构建好的载体要导入到感受态细胞里，这个感受态细胞要从哪里购得呢？

4.我的A4是从中国农业微生物菌种保藏中心（中国农业科学院里面）买的，一开始摇菌OD值0.6左右-20度冻菌，后拿出摇菌6小时左右就能达到OD值0.6，可以直接感染叶片诱导毛状根，请问如果总是这样冻菌，农杆菌A4里面的250KB大质粒会不会容易丢失。。。。

5.大家提大质粒是不是有专门的提大质粒试剂盒呀？

啰啰嗦嗦这么多，科研的路上真的很艰辛啊，不懂的地方，只能麻烦各位虫友了。。。真心真心感谢。。。