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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 纤维素分解菌，望高人指教
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mashuge at 2013-05-22 00:09:23
我看的浙江大学付丽丽的作物秸秆的纤维素降解菌的分离与筛选优秀硕士论文里的培养基，不过我也觉得可能我的培养基中的羧甲基纤维素钠加多了，还有我看有培养基中加氯化钠PH7.0？这是什么做样？...

氯化钠pH7.0?
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處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
11楼2013-05-22 12:20:07
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latte33

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-12-21 11:12:29
CMC-Na 2.0g, (NH4)2SO4 2.0g, MgSO4•7H2O 0.5g, K2HPO4 1.0g, 刚果红0.4g, 琼脂15~20g, 去离子水1000mL, pH 7.0。直接添加刚果红到固体培养基中，然后再把菌种接到平板上，降解菌就会出现水解圈了。

我做细菌纤维素降解菌也有这个疑惑，加蛋白胨酵母后也没有水解圈，刚果红是在固体培养基灭完菌凝固之前加，然后在倒平板吗？

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12楼2013-11-21 23:50:17
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latte33

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by mashuge at 2013-05-22 00:09:23
我看的浙江大学付丽丽的作物秸秆的纤维素降解菌的分离与筛选优秀硕士论文里的培养基，不过我也觉得可能我的培养基中的羧甲基纤维素钠加多了，还有我看有培养基中加氯化钠PH7.0？这是什么做样？...

想问下你的培养基最后怎么配的呢？我现在加0.5％的羧甲基纤维素钠后也是很粘稠，不会像LB那样

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2013-11-21 23:54:07
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Virginiaの

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看了你的方法，我觉得你可以在培养基直接添加刚果红，制成CMC-刚果红琼脂培养基，这样如果CMC被降解就可以直观地看到水解圈了，不用再经过染色等麻烦的步骤。但是有一点，水解圈大的酶活未必就是高的，有一些水解圈小或者没有水解圈的也可能会有酶活力，建议你查阅这篇文献：
Teather RM, Wood PJ: Use of Congo red-polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen
里面会讲到一些水解圈与酶活方面的关系，水解圈和酶活并不一定是成正比关系。你还需要通过液体培养然后进行酶活力测定才能确定是否有酶活。之前我在平板上看到有水解圈，但是进行液体培养后测酶活，结果显示没有检测到纤维素酶酶活，也有可能我选用的液体培养基不合适，所以现在也需要用不同液体培养基进行尝试，总之就是要多查阅文献。
还有一个问题，你培养基中有蛋白胨，如果有蛋白酶产生，那么也有可能会出现水解圈，之前我所用的筛选培养基中有明胶（肽分子聚合物质），有一次老师提过说水解圈可能是因为明胶降解后产生的，所以我把明胶去掉后，发现没有水解圈了，所以在筛选培养基中，你所用的天然成分应该尽量少一些，以免带来不必要的干扰。另外一篇参考文献：
张壮志：高效纤维素分解菌的筛选、鉴定及其生长条件和产酶活性的研究
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闲看庭前花开花落，漫随天外云卷云舒。
14楼2013-11-22 09:09:58
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mashuge

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by latte33 at 2013-11-21 23:54:07
想问下你的培养基最后怎么配的呢？我现在加0.5％的羧甲基纤维素钠后也是很粘稠，不会像LB那样
...

我在灭菌之前用微波将其溶解好，还有就是我琼脂加的少，我琼脂加1.2%，就会好很多，刚果红的量减半透明圈很明显
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珍惜自己现在拥有的，别等失去才追悔莫及，人只有经历了才会懂才会成熟，加油，未来的日子好好过！
15楼2014-01-17 13:43:12
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cl8682535

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-12-21 11:12:29
CMC-Na 2.0g, (NH4)2SO4 2.0g, MgSO4•7H2O 0.5g, K2HPO4 1.0g, 刚果红0.4g, 琼脂15~20g, 去离子水1000mL, pH 7.0。直接添加刚果红到固体培养基中，然后再把菌种接到平板上，降解菌就会出现水解圈了。

前辈你好！我筛选产纤维素酶的细菌，但是按此方法并没有明显的现象产生，是不是培养时间不够，我培养了2d。
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16楼2016-09-02 10:01:25
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cl8682535 at 2016-09-02 10:01:25
前辈你好！我筛选产纤维素酶的细菌，但是按此方法并没有明显的现象产生，是不是培养时间不够，我培养了2d。...

你好，我当时按照这个方法有较明显的水解圈。你再等两天，或者设置一个对照。

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處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
17楼2016-09-02 10:10:25
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cl8682535

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by Virginiaの at 2013-11-22 09:09:58
看了你的方法，我觉得你可以在培养基直接添加刚果红，制成CMC-刚果红琼脂培养基，这样如果CMC被降解就可以直观地看到水解圈了，不用再经过染色等麻烦的步骤。但是有一点，水解圈大的酶活未必就是高的，有一些水解圈 ...

你好！在张壮志的论文中写到：“待菌苔长出后，观察水解圈情况，将菌落用1mg/L刚果红染色5min，将颜色变红的菌落继续划线分离。”
刚果红与纤维素产生沉淀，显红素，我们不应该是挑选有溶解圈，显淡黄色的菌落吗？
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18楼2016-09-02 10:20:22
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